Este kit de enriquecimiento de quinasa Thermo Scientific Pierce utiliza una sonda ActivX™ ATP para etiquetar de forma covalente el sitio activo de las ATPasas, incluidas las chaperonas y las enzimas metabólicas, para permitir su enriquecimiento selectivo mediante una etiqueta de destiobiotina.

La sonda ActivX ATP cuenta con un nucleótido análogo reactivo a la amina y una etiqueta de destiobiotina (biotina análoga) que facilita el marcado selectivo de lisinas en el sitio activo de quinasas y, a continuación, el enriquecimiento y la recuperación posteriores de proteínas etiquetadas. Estas características permiten identificar y perfilar las clases de enzimas objetivo en las muestras o evaluar la especificidad y afinidad de los inhibidores de enzimas.

Características del kit de enriquecimiento de quinasa Pierce:

• Específico: etiqueta solo los lisines de sitio activo conservados de proteínas de unión a nucleótidos
• Flexible: para el etiquetado in vitro de enzimas ATPase derivadas de células o tejidos
• Compatible: uso con flujos de trabajo Western blot o de espectrometría de masas (MS)

Aplicaciones:
• Perfilar las afinidades de unión de moléculas pequeñas y la inhibición del sitio activo de una forma dependiente de la dosis
• Identificar de decenas a cientos de inhibidores objetivo y no objetivo fuera de los tejidos, células y proteomas subcelulares
• Enriquecer las enzimas en base a la función

La destiobiotina-ATP Thermo Scientific ActivX es un derivado nucleótido que modifica de forma covalente el sitio activo de enzimas en residuos de lisina conservados en el sitio de unión de nucleótidos. La estructura de estas sondas consiste en una biotina modificada (destiobiotina) unida al nucleótido a través de un enlace de acilo-fosfato lábil. La destiobiotina es un análogo de la biotina que se une menos estrechamente a las proteínas de unión a biotina, lo que resulta en una unión que se invierte fácilmente por el desplazamiento de la biotina, el pH bajo o la desnaturalización de calor.

Las sondas de destiobiotina-ATP se pueden utilizar para enriquecer, identificar y perfilar de forma selectiva las clases de enzimas objetivo o evaluar la especificidad de los inhibidores de enzimas. Debido a que muchas ATPasas y otras proteínas de unión a nucleótidos se unen a nucleótidos o inhibidores incluso cuando están enzimáticamente inactivos, las sondas de destiobiotina permiten el perfilado de enzimas activas e inactivas en una muestra compleja. La preincubación de muestras con inhibidores de moléculas pequeñas que compiten por sitios activos puede usarse para determinar la afinidad de unión de inhibidores. Las sondas de nucleótidos de sitio activo también se pueden utilizar para identificar los inhibidores fuera de los objetivos.

Estos productos están sujetos a un uso limitado de licencia de etiqueta.

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