Search Thermo Fisher Scientific
Invitrogen™
GeneRacer™ Kit with SuperScript™ III RT and TOPO TA Cloning™ Kit for Sequencing
El kit GeneRacer™ proporciona un método para obtener extremos 5' y 3' de longitud completa de ADNc mediante una secuencia Más información
Número de catálogo L150201
Precio (EUR)/ 1 kit*
1.266,00
-
Precio (EUR)/ 1 kit*
1.266,00
GeneRacer™ Kit with SuperScript™ III RT and TOPO TA Cloning™ Kit for Sequencing
Número de catálogoL150201
Precio (EUR)/ 1 kit*
1.266,00
-
El kit GeneRacer™ proporciona un método para obtener extremos 5' y 3' de longitud completa de ADNc mediante una secuencia de ADNc conocida procedente de etiquetas de secuencias expresadas (EST), ADNc sustraído, visualización diferencial o detección de bibliotecas. El kit garantiza la amplificación de solo los transcritos de longitud completa mediante la eliminación de mensajes truncados del proceso de amplificación. Los productos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) RACE se pueden clonar con rapidez y facilidad mediante el uso del kit de clonación de PCR Zero Blunt™ TOPO™ o el kit TOPO TA Cloning™ para secuenciación (productos de PCR con salientes 3'-A). Mediante el uso de los protocolos facilitados, los extremos de ADNc de transcritos poco frecuentes (30 copias/célula) y largos (9 kb) se pueden amplificar y secuenciar con 1 µg de ARN total como material de partida. Con el kit GeneRacer™ puede:
• Genera ADNc de transcritos de al menos 10 kb de longitud
• Obtiene el extremo 5´ de longitud completa de transcritos poco frecuentes en menos de 30 copias por célula
• Clonar los extremos 5´ y 3´ de longitud completa para construir la secuencia de ADNc completaSuperScript™ III RT
El kit GeneRacer™ está disponible con la transcriptasa inversa (RT) SuperScript™ III para obtener una amplificación mejorada del extremo 5 ´ de longitud completa del ARNm largo y complejo. La parte de ARNasa H de RT SuperScript™ III se ha mutado para evitar la disociación de ARNm durante la síntesis de ADNc. Esto aumenta el tamaño y la producción de ADNc. RT SuperScript™ III es más termoestable que las RT naturales. Esto permite la transcripción inversa a altas temperaturas, lo que relaja la estructura secundaria de plantillas complejas y permite que la síntesis de ADNc se complete.Funcionamiento del kit GeneRacer™
El kit GeneRacer™ garantiza que solo se amplifican los transcritos que contienen extremos de ADNc de longitud completa (consulte la figura). El avanzado protocolo comienza en el nivel de ARN y se centra específicamente solo en ARNm con caperuza 5´. En los pasos siguientes, se retira la caperuza y se sustituye con el oligonucleótido de ARN GeneRacer™. Durante la transcripción inversa, la secuencia de oligonucleótido de ARN GeneRacer™ se incorpora al ADNc. Solo el ADNc que se haya transcrito de manera inversa completamente contendrá esta secuencia conocida. A continuación se realiza una PCR 5´ RACE mediante el uso del primer de 5´ GeneRacer™ específico de la secuencia de oligonucleótido de ARN GeneRacer™ y un primer específico del gen. El resultado es ADN amplificado que contiene la secuencia de ADNc de 5´ de longitud completa.Sensibilidad y longitud
Con el fin de demostrar la capacidad del kit GeneRacer™ para capturar el ADNc de 5 ´ de longitud completa, se han amplificado los extremos 5 ´ de genes con sitios conocidos de inicio de transcripciones. Comenzando con ARN total y siguiendo el protocolo de GeneRacer™, se amplificaron tanto los transcritos largos (10 kb) como los mensajes poco frecuentes presentes en el 0,01 % o 30 copias por célula (consulte la figura).
• Genera ADNc de transcritos de al menos 10 kb de longitud
• Obtiene el extremo 5´ de longitud completa de transcritos poco frecuentes en menos de 30 copias por célula
• Clonar los extremos 5´ y 3´ de longitud completa para construir la secuencia de ADNc completaSuperScript™ III RT
El kit GeneRacer™ está disponible con la transcriptasa inversa (RT) SuperScript™ III para obtener una amplificación mejorada del extremo 5 ´ de longitud completa del ARNm largo y complejo. La parte de ARNasa H de RT SuperScript™ III se ha mutado para evitar la disociación de ARNm durante la síntesis de ADNc. Esto aumenta el tamaño y la producción de ADNc. RT SuperScript™ III es más termoestable que las RT naturales. Esto permite la transcripción inversa a altas temperaturas, lo que relaja la estructura secundaria de plantillas complejas y permite que la síntesis de ADNc se complete.Funcionamiento del kit GeneRacer™
El kit GeneRacer™ garantiza que solo se amplifican los transcritos que contienen extremos de ADNc de longitud completa (consulte la figura). El avanzado protocolo comienza en el nivel de ARN y se centra específicamente solo en ARNm con caperuza 5´. En los pasos siguientes, se retira la caperuza y se sustituye con el oligonucleótido de ARN GeneRacer™. Durante la transcripción inversa, la secuencia de oligonucleótido de ARN GeneRacer™ se incorpora al ADNc. Solo el ADNc que se haya transcrito de manera inversa completamente contendrá esta secuencia conocida. A continuación se realiza una PCR 5´ RACE mediante el uso del primer de 5´ GeneRacer™ específico de la secuencia de oligonucleótido de ARN GeneRacer™ y un primer específico del gen. El resultado es ADN amplificado que contiene la secuencia de ADNc de 5´ de longitud completa.Sensibilidad y longitud
Con el fin de demostrar la capacidad del kit GeneRacer™ para capturar el ADNc de 5 ´ de longitud completa, se han amplificado los extremos 5 ´ de genes con sitios conocidos de inicio de transcripciones. Comenzando con ARN total y siguiendo el protocolo de GeneRacer™, se amplificaron tanto los transcritos largos (10 kb) como los mensajes poco frecuentes presentes en el 0,01 % o 30 copias por célula (consulte la figura).
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Cepa bacteriana o de levaduraTOP10
Método de clonaciónTOPO TA
FormatoKit
Para utilizar con (aplicación)Transcripción inversa
IncluyeMódulo GeneRacer: 2 x 1,5 ml de agua estéril, 24 μl de RNaseOut, 6 μl de cada fosfatasa intestinal de Calf (CIP), tampón CIP, pirofosfatasa de ácido de tabaco (TAP), tampón TAP 10X, ligasa de ARN T4, tampón de ligasa de ARN 10X T4, y 10 mm ATP, 6 x 250 ng de oligonucleótido de ARN GeneRacer, 2 x 1 ml de fenol/cloroformo, 36 μl de glucógeno de mejillón, 200 μl de acetato de sodio (3M), 225 μl de cada cebador GeneRacer 5 ', 5 ' cebadores anidados, 3 ' cebadores, y 3 ' cebadores anidados, 20 μl de ARN total de control de HeLa (500 ng/μl), 15 μl de cada cebador de control A y cebador de control B.1; módulo RT de SuperScript III: 6 μl de transcriptasa inversa SuperScript III (200 U/μl),15 μl de tampón de primera cadena 5X, 24 μl de DTT (0,1M), 6 μl de RNasaH (2 U/μl), 6 μl de cebadores aleatorios (100 ng/μl), 6μl de cebador de oligo(dT) de GeneRacer (900 ng/μl), 6 μl de mezcla dNTP (10 mmcada una), 10 de S.N.A.P. Columnas, kit de clonación TOPO TA para secuenciación (-20 °C), suficientes reactivos y una inyección TOP10 químicamente competente E. coli
Línea de productosGeneRacer™, SuperScript™, TA Cloning™, TOPO™
Tipo de productoKit de clonación
Cantidad1 Kit
VectorpCR4-TOPO TA
Unit Size1 kit*
Contenido y almacenamiento
Almacene cada módulo como se indica:
Módulo GeneRacer™ (–20 °C):
• 2 × 1,5 ml de agua esterilizada
• 24 µl de RNaseOut™
• 6 µl de cada fosfatasa intestinal de Calf (CIP), tampón CIP, pirofosfatosa de ácido de tabaco (TAP), tampón TAP 10X, ligasa de ARN T4, tampón de ligasa de ARN 10X T4, y 10 mm ATP
• 6 × 250 ng de oligonucleótido de ARN de GeneRacer™
• 2 × 1 ml fenol/cloroformo
• 36 µl glucógeno de mejillón
• 200 µl de acetato de sodio (3 M)
• 225 µl de cada cebador de 5 ′ de GeneRacer™, 5 ′ cebador anidado, 3 ′ cebador anidado y 3 ′ cebador anidado
• 20 µl de control de ARN total de HeLa (500 ng/µl)
• 15 µl cada cebador de control A y cebador de control B.1
Módulo RT de SuperScript™ III (-20 °C)
• 6 µl de transcriptasa inversa SuperScript™ III (200 U/µl)
• 24 µl 5X tampón de primera cadena
• 15 µl DTT (0,1 M)
• 6 µl RNasaH (2 U/µl)
• 6 µl de cebadores aleatorios (100 ng/µl)
• 6 µl de cebador de oligo(dT) de GeneRacer™ (900 ng/µl)
• 6 µl de mezcla dNTP (10 mm cada uno)
10 S.N.A.P.™ Columnas (a temperatura ambiente)
Kit de clonación TOPO TA™ para secuenciación (-20 °C)
• Reactivos suficientes y una inyección E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10 (almacenar a -80 °C) para clonar 10 productos de PCR GeneRacer™; Módulo GeneRacer (-20 °C), módulo SuperScript III RT (-20 °C), E. coli competente (almacenar a -80 °C), S.N.A.P. Columnas (a temperatura ambiente), kit de clonación de TA TOPO para secuenciación (-20 °C)
Módulo GeneRacer™ (–20 °C):
• 2 × 1,5 ml de agua esterilizada
• 24 µl de RNaseOut™
• 6 µl de cada fosfatasa intestinal de Calf (CIP), tampón CIP, pirofosfatosa de ácido de tabaco (TAP), tampón TAP 10X, ligasa de ARN T4, tampón de ligasa de ARN 10X T4, y 10 mm ATP
• 6 × 250 ng de oligonucleótido de ARN de GeneRacer™
• 2 × 1 ml fenol/cloroformo
• 36 µl glucógeno de mejillón
• 200 µl de acetato de sodio (3 M)
• 225 µl de cada cebador de 5 ′ de GeneRacer™, 5 ′ cebador anidado, 3 ′ cebador anidado y 3 ′ cebador anidado
• 20 µl de control de ARN total de HeLa (500 ng/µl)
• 15 µl cada cebador de control A y cebador de control B.1
Módulo RT de SuperScript™ III (-20 °C)
• 6 µl de transcriptasa inversa SuperScript™ III (200 U/µl)
• 24 µl 5X tampón de primera cadena
• 15 µl DTT (0,1 M)
• 6 µl RNasaH (2 U/µl)
• 6 µl de cebadores aleatorios (100 ng/µl)
• 6 µl de cebador de oligo(dT) de GeneRacer™ (900 ng/µl)
• 6 µl de mezcla dNTP (10 mm cada uno)
10 S.N.A.P.™ Columnas (a temperatura ambiente)
Kit de clonación TOPO TA™ para secuenciación (-20 °C)
• Reactivos suficientes y una inyección E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10 (almacenar a -80 °C) para clonar 10 productos de PCR GeneRacer™; Módulo GeneRacer (-20 °C), módulo SuperScript III RT (-20 °C), E. coli competente (almacenar a -80 °C), S.N.A.P. Columnas (a temperatura ambiente), kit de clonación de TA TOPO para secuenciación (-20 °C)