Le kit d’estimation de la teneur en phosphate des phosphoprotéines Thermo Scientific permet de classifier et d’identifier des protéines phosphorylées (sérine et thréonine), et également de réaliser une évaluation semi-quantitative du niveau de phosphorylation.

Caractéristiques du Kit d’estimation de la teneur en phosphate des phosphoprotéines :

• Spécifique : mesure la phosphosérine (p-Ser) et la phosphothréonine (p-Thr) uniquement ; ne mesure pas la phosphotyrosine (p-Tyr)
• Pratique : les protocoles de tubes à essai et de microplaques à 96 puits sont inclus et nécessitent moins de 90 minutes
• Semi-quantitatif : permet de calculer les moles de phosphate (P) par mole de protéine en utilisant l’étalon de phosvitine inclus
• Personnalisable : lorsque des étalons préalablement caractérisés sont disponibles, le format peut être adapté au développement de dosages spécifiques pour des phosphoprotéines pures

Le kit d’estimation de la teneur en phosphate des phosphoprotéines est conçu pour faciliter la caractérisation de l’état et de l’étendue de la phosphorylation des échantillons protéiques purifiés. Le dosage est basé sur l’hydrolyse alcaline du phosphate des résidus séryle et thréonyle dans les phosphoprotéines et sur la quantification du phosphate libéré par le vert malachite et le molybdate d’ammonium. Le dosage, qui dure environ une heure, peut être facilement réalisé dans des microplaques à 96 puits ou dans des tubes à essai.

Applications :
• Identification des protéines contenant des phosphorylations phospho-sérine ou phospho-thréonine
• Estimation de la quantité de phosphorylation pS et pT
• Développement de dosages quantitatifs spécifiques pour des phosphoprotéines d’intérêt bien caractérisées

Le dosage peut permettre d’identifier si une protéine purifiée contient des phospho-sérines (p-Ser) ou des phospho-thréonines (p-Thr) et peut être utilisé pour estimer le niveau de ce type de phosphorylation. Pour la quantification, l'échantillon protéique de test est comparé à des concentrations spécifiques de phosvitine, une phosphoprotéine ayant un niveau de phosphorylation connu. L'étape d'hydrolyse alcaline ne libère pas le phosphate des résidus phospho-tyrosine (p-Tyr) dans la liaison peptidique. Par conséquent, un résultat négatif pour une préparation protéique purifiée inconnue indique que la protéine (1) n’est pas une phosphoprotéine ou (2) est exclusivement phosphorylée au niveau des résidus tyrosine. Dans ce dernier cas, il sera nécessaire de réaliser une analyse par transfert Western avec un anticorps anti-phosphotyrosine afin de différencier les deux possibilités.