Les kits de séquençage TOPO® TA Cloning® offrent une stratégie de clonage en une seule étape, en 5 minutes et très efficace (“clonage TOPO®”) pour l’insertion directe de produits PCR amplifiés par polymérase Taq dans un vecteur plasmidique à des fins de séquençage. Chaque kit utilise le vecteur pCR™4-TOPO® TA avec des sites d’amorce de séquençage spécifiquement conçus, qui permettent, pour chaque réaction, d’augmenter la séquence d’insert et de réduire celle de vecteur. Selon vos besoins et votre budget, ces kits peuvent comporter tout un éventail de cellules compétentes, ou aucune de ces cellules. Ces kits incluent tout ce dont vous avez besoin pour cloner et sélectionner les vecteurs recombinants contenant le fragment de PCR de votre choix. Caractéristiques des kits de séquençage TOPO® TA Cloning® :

• Augmentation des séquences—permet d’augmenter la séquence d’insert et de réduire celle du vecteur lors de l’utilisation d’amorces de séquençage standard
• Simplicité et rapidité—passez de la PCR aux clones en 3 étapes en un temps de manipulation inférieur à 5 minutes
• Efficacité—obtenez jusqu’à 95 % de clones avec le bon insert
• Résultats prouvés—performances fiables pendant plus d’une décennie avec plus de 4 000 citations

Kits de séquençage TOPO® TA Cloning®—Présentation

Vecteur : vecteur TA pCR™4-TOPO®—Vecteur de clonage optimisé pour des résultats de séquençage améliorés

Méthode de clonage : TOPO® TA Cloning® —topoisomérase – I, ligature en, 5 minutes des produits PCR avec des saillies de 3´A (amplification Taq) sur le vecteur

Cellules compétentes : Plusieurs options—faites votre choix parmi les kits qui proposent des cellules compétentes générales, à efficacité élevée, résistantes au bactériophage T1 ou à croissance rapide, ou utilisez votre propre

vecteur TA pCR™4-TOPO®—optimisé pour le séquençage
Nous avons éliminé la majeure partie du site de clonage multiple du vecteur TA pCR™4-TOPO® pour raccourcir la distance entre les sites d’amorce de séquençage et le site d’insertion à une valeur aussi faible que 33 bp. Résultat : les réactions de séquençage diminuent la séquence de vecteur et augmentent celle de l’insertion. Le vecteur TA pCR™4-TOPO® comprend des sites pour 4 amorces de séquençage communes : M13 direct, M13 inverse, T7 et T3. Les kits incluent une aliquote de chaque.

Sélection et manipulation de clones TA pCR™4-TOPO®
Le vecteur TA pCR™4-TOPO® contient à la fois des Marquages de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine et une fusion de gènes LacZα-ccdB pour une sélection positive et une sélection bleu/blanc. Le site de clonage multiple minimisé du vecteur inclut toujours des sites EcoRI de flanquement pour l’excision simplifiée des produits de PCR clonés et un site Sse8387I unique pour la génération des suppressions imbriquées avant le séquençage. Les promoteurs T7 et T3 sont également présents pour la transcription in vitro.

Clonage simplifié basé sur TOPO®
Grâce à la technologie de clonage TOPO®, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase, d’incuber pendant 5 minutes et de la transformer avec les cellules compétentes E. coli fournies.

Clonage efficace
Avec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, vous n’avez plus besoin d’analyser autant de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur TA pCR™4-TOPO® utilisé dans ce kit est livré avec des saillies de 3´T pour une ligature efficace des produits PCR amplifiés Taq, qui contient des saillies de 3´A.

La norme du clonage
En matière de clonage, la technologie de clonage TOPO® est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple à utiliser et efficace, le clonage TOPO® a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.

Kits TOPO® TA Cloning® pour séquençage—options de kit
Le kit de séquençage TOPO® TA Cloning® peut être acheté avec une variété de cellules compétentes offrant différents avantages selon vos besoins :

• Clonage général : TOP10 (No de catalogue K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Clonage haute efficacité : Cellules ™ TOP10 Electrocomp (No de catalogue K4580-01, K4580-40)
• Clonage général, résistance aux bactériophages T1 : DH5α-T1R (No de catalogue K4595-01, K4595-40)
• Croissance rapide : Mach1™-T1R chimiquement compétente E. Coli (No de catalogue K4530-20)
• Fournissez le vôtre : pour une souplesse et des économies accrues (réf. nº 450030)

Nous proposons également une version du kit qui inclut un kit de minipréparation d’ADN plasmidique rapide PureLink™ (réf. K4575-02) à utiliser pour l’isolement de plasmide recombinant propre et prêt pour le séquençage.

Liens connexes

• Services de construction et de clonage de vecteurs personnalisés
• Guide de sélection du kit de purification d’ADN plasmidique
• Réactifs, instruments et fournitures PCR