La NHS-fluorescéine est un dérivé réactif à l’amine d’un colorant fluorescéine utile dans de nombreuses applications comme le marquage d’anticorps et d’autres sondes, à utiliser en microscopie par fluorescence, en cytométrie en flux et lors de dosages basés sur l’immunofluorescence, comme le transfert Western et la méthode ELISA. L’ester de NHS de la fluorescéine est un marqueur efficace d’anticorps et d’autres protéines purifiées aux amines primaires (chaînes latérales de lysine)

Propriétés de la NHS-fluorescéine :

• Autre nom : 5/6-FAM SE
• Dénomination chimique : Ester de succinimide de 5/6-carboxyfluorescéine
• Poids moléculaire : 473,4
• Source d’excitation : Ligne spectrale de 488 nm, laser d’ions argon
• Longueur d’onde d’excitation : 494 nm
• Longueur d’onde d’émission : 518 nm
• Coefficient d’extinction : > 70 000 M^-1 cm^-1
• Numéro CAS : 117548-22-8
• Pureté : > 90% par HPLC
• Solubilité : Soluble dans le DMF ou le DMSO
• Groupes réactifs : L’ester de NHS réagit avec les amines primaires à un pH entre 7,0 et 9,0

La NHS-fluorescéine est activée avec le groupe fonctionnel N-hydroxy-succinimidyl-ester (ester de NHS). Par rapport à la FITC, le dérivé ester de NHS a une plus grande spécificité avec les amines primaires en présence d’autres nucléophiles et entraîne un lien plus stable après le marquage. Les colorants fluorescéines réactifs aux amines sont des mélanges d’isomères associés à des groupes réactifs fixés aux positions 5 et 6 de l’anneau inférieur. Les propriétés de ces isomères sont indiscernables en matière de spectres d’excitation et d’émission ; il n’est pas nécessaire, pour les applications protéiques, d’isoler un isomère spécifique.

Applications
• Marquage des anticorps à utiliser comme sondes immunofluorescentes
• Marquage des oligonucléotides devant servir comme sondes d’hybridation
• Détection des protéines dans les gels et les transferts Western

Produits associés
FITC (isothiocyanate 5/6-fluorescéine), mélange isomérique
Kit de marquage d’anticorps NHS-fluorescéine Pierce™
Kit de marquage d’anticorps FITC Pierce™