Le réactif Thermo Scientific Y-PER pour l’extraction des protéines de levure est le premier réactif de lyse de levure disponible dans le commerce qui utilise une procédure de lyse par un détergent doux afin de libérer des protéines solubilisées fonctionnellement actives avec une grande efficacité.

Caractéristiques du réactif d’extraction des protéines de levure PER :

• Plus de protéines — extrait plus de deux fois plus de protéines que les méthodes de microbilles en verre
• Moins fastidieux — élimine les difficultés associées aux procédures de lyse traditionnelles avec des microbilles en verre (p. ex., adhérence statique des billes chargées, amas de microbilles/protéines et perte de microbilles)
• Optimisé pour la levure — validé pour une utilisation avec Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe et Pichia pastoris
• Polyvalente — efficace pour de nombreux organismes différents, notamment Bacillus subtilus et les bactéries gram-positif et gram-négatif ; adapté à une utilisation dans une gamme variée de situations

Le tampon de lyse cellulaire à base de détergent élimine la nécessité de recourir à des microbilles de verre ou à un traitement mécanique agressif tout en utilisant de puissants agents réducteurs, des produits chimiques et des valeurs extrêmes de pH et de température afin de percer l’épaisse enveloppe cellulaire protéique et d’extraire les protéines. Le protocole populaire de lyse par des billes de verre exige un équipement spécial et doit être réalisé à 4°C. Les faibles rendements protéiques communément obtenus par cette technique sont le résultat d’une dénaturation et d’une liaison non spécifique des protéines aux billes de verre. Le réactif Y-PER, en revanche, utilise un simple protocole à température ambiante qui peut être réalisé en 20 minutes et sans aucun équipement spécial.

Le réactif Y-PER offre un protocole standard facile à utiliser pour les extractions de protéines impliquant l’ajout d’un volume approprié de réactif Y-PER aux cellules de levure pellétisées, une incubation à température ambiante pendant environ 20 minutes puis une centrifugation des débris. Le surnageant obtenu est une solution protéique concentrée dont le rendement excède largement celui typiquement obtenu par une rupture traditionnelle avec des billes de verre.

De par leur nature unicellulaire et leur aptitude à entraîner des modifications post-traductionnelles qui imitent étroitement des processus observés chez les eucaryotes supérieurs, les levures sont devenues d’importants outils de recherche. Les levures ont aujourd’hui un rôle irremplaçable dans le secteur de la recherche grâce aux nombreux vecteurs disponibles ainsi qu’au développement de systèmes d’expression recombinants. Le réactif Y-PER est efficace pour S. cerevisiae et d’autres espèces courantes : il peut ainsi être utilisé lors de procédures de purification de protéines de fusion marquées et de dosages enzymatiques de gènes rapporteurs utilisant ces organismes modèles. Le réactif de lyse peut également être utilisé pour extraire de l’ADN génomique ou plasmidique à partir d’une levure.

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Réactif d’extraction de protéines de levure dialysable Y-PER™Plus