Le kit d’essai de cytométrie de flux Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 647 fournit un essai plus simple et plus fiable pour analyser la réplication de l’ADN dans les cellules en prolifération par rapport aux méthodes BrdU traditionnelles. L’ADN nouvellement synthétisé est analysé avec le laser du cytomètre en flux à 633/5 nm.

• Précis :Des résultats supérieurs par rapport aux essais BrdU
• Rapide :Des résultats en seulement 90 minutes.
• Économique :Plus de dosages par kit

Consultez notre guide de sélection de tous les dosages Click-iT™ EdU et Click-iT™ Plus EdU pour la cytométrie en flux.

Une méthode avancée dont les résultats sont supérieurs aux dosages BrdU
La méthode la plus précise pour analyser la prolifération consiste à mesurer directement la synthèse d’ADN. À l’origine, ceci était effectué en incorporant des nucléosides radioactifs (3H-thymidine) Cette méthode a été remplacée par la détection à base d’anticorps de l’analogue de nucléoside, bromodésoxyuridine (BrdU). L’essai de cytométrie de flux Click-iT™ Plus EdU est une alternative innovante à l’essai BrdU. EdU (5-éthynyl-2´-désoxyuridine) est un analogue de la thymidine, incorporé à l’ADN lors de la synthèse active de l’ADN. La détection se base sur la chimie clic, une réaction covalente entre un azide et un alcyne, catalysée par le cuivre. Dans cette application, l’alcyne se trouve dans la fraction éthynyle de l’EdU, alors que l’azide est couplé au colorant Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647 ou Pacific BlueTM. Les méthodes traditionnelles de cytométrie en flux sont utilisées pour déterminer le pourcentage de cellules en phase S dans la population (Fig. 1).

Conditions douces lui permettant d’être utilisé avec des anticorps et des colorants de cycle cellulaire
Les avantages du marquage à l’EdU Click-iT™ deviennent rapidement évidents lors de la réalisation de l’essai (Fig. 2) La petite taille du colorant azide permet de détecter efficacement l’EdU incorporé dans des conditions douces, tandis que la fixation standard à base d’aldéhyde et la perméabilisation du détergent suffisent pour que le réactif de détection Click-iT™ puisse accéder à l’ADN. Par comparaison, les essais BrdU exigent de dénaturer l’ADN (à l’aide de HCl, de chaleur ou de digestion avec la DNase) pour exposer le BrdU afin qu’il puisse être détecté avec un anticorps anti-BrdU. Le traitement des échantillons en vue d’un essai BrdU peut entraîner l’altération de signal de la distribution du cycle cellulaire, ainsi que la destruction des sites de reconnaissance d’antigènes lorsque la méthode HCl est utilisée. Le kit de prolifération cellulaire EdU facile d’utilisation, lui, est compatible avec les colorants du cycle cellulaire. Ce kit d’essai biologique EdU peut également être multiplexé avec des anticorps contre des marqueurs intracellulaires et de surface.

Protocole rapide et simple
Le protocole Click-iT™ EdU se base sur la fixation de l’aldéhyde et les étapes de perméabilisation du détergent pour le marquage immunohistochimique des anticorps, mais l’EdU est compatible avec d’autres agents de
fixation/perméabilisation, dont la saponine et le méthanol. Vous serez prêt à analyser vos données de prolifération cellulaire après seulement cinq étapes :

• Traitez les cellules avec de l’EdUM
• Fixez et perméabilisez les cellules
• Détectez, en 30 minutes, les cellules en phase S avec le cocktail de détection Click-iT™ Plus.
• Lavez une fois
• Analysez

Des résultats précis et économiques
Grâce à l’augmentation du nombre d’essais par kit, le kit d’essai pour cytométrie en flux Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 647 se veut plus économique que les essais BrdU traditionnels et, donc, idéal pour les expériences de grande envergure.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Non destiné à des fins thérapeutiques ou diagnostiques humaines ou animales.