Les produits de transposon Thermo Scientific sont basés sur les machines de transposition du bactériophage Mu. Au cours de la phase lytique du cycle de vie du phage, la machine reproduit son génome par transposition répétée à l’intérieur du génome hôte. La réaction de transposition Mu a été modifiée en une réaction in vitro catalysée par une seuleenzyme : MuA Transposase. Dans ce système, une réaction in vitro est capable de générer plus d’un million de clones par insertion de transposons.

Le système de génération de mutations (kit MGS) et le système de génération d’arrêts (kit STOP) ont été développés pour l’analyse fonctionnelle des protéines. Ces nouveaux outils de transposon permettent la création de bibliothèques saturées de protéines mutées en une seule réaction moyennant un temps de manipulation plus faible que les autres méthodes. L’emplacement de l’insertion d’un transposon dans chaque clone muté peut être cartographié par PCR ou séquençage. Grâce aux kits MGS et STOP, des milliers de clones mutés sont prêts pour des études d’expression en 2 à 3 jours seulement.

Le kit MGS contient l’ensemble complet de réactifs pour la mutagénèse par balayage liant à base de transposons de n’importe quelle protéine cible. Les entranceposons du MGS sont conçus pour apporter des changements subtils dans la structure d’une protéine cible en insérant des liants in-frame de 15 bp dans tout le gène cible correspondant. Cette insertion cadrée permet la conservation des séquençages en aval.

Les Entranceposons du STOPKit contiennent des codons d’arrêt translationnels dans les trois cadres de lecture situés dans la portion à terminaison de la séquence de transposon. La modification propriétaire du Stop Generation System permet de générer une bibliothèque de suppression de terminal C saturée à partir de pratiquement n’importe quelle protéine cible moyennant une addition maximale de trois acides aminés.

Caractéristiques :

• Efficace : créez des bibliothèques d’insertion saturées pour le séquençage et l’analyse des protéines en une seule réaction
• Rapide : réduisez le temps de manipulation par rapport aux méthodes classiques
• Aléatoire : éliminez la préférence du site cible ou l’insertion d’un point chaud

Applications

Le kit STOP produit des protéines tronquées pour les dosages fonctionnels de :

• Enzymes
• Récepteurs
• Protéines structurales, etc.

Le kit MGS génère au hasard quinze insertions in vitro de paires de base dans tout ADN cible pour :

• La génération rapide de cinq bibliothèques d’insertion d’acides aminés in-frame de n’importe quelle protéine pour les analyses fonctionnelles
• La mutagénèse rapide et aléatoire de promoteurs clonés et d’autres régions d’ADN régulatrices
• L’insertion aléatoire d’un site d’enzymes de restriction NotI dans n’importe quel clone d’ADN cible

Avantages
Kit MGS

• Des milliers de clones d’insertion différents à partir d’une réaction unique
• Génère des insertions aléatoires de 5 acides aminés dans les 3 cadres de lecture
• Insertions courtes cadrées ; pas de codons d’arrêt
• Flexibilité dans la cartographie des mutants d’intérêt : les mutations sont facilement cartographiées par NotI ou PCR
• Plus rapide et efficace que la mutagénèse par balayage liant
• STOPKit

• Bibliothèque saturée de protéines tronquées à partir d’une seule réaction en deux jours
• Codon d’arrêt translationnel dans les trois cadres de lecture
• La séquence d’ADN cible peut être inconnue
• Plus rapide et plus efficace que les méthodes conventionnelles
• Aucune amorce spécifique requise

Produits associés
MuA Transposase
MuA Transposase (concentrée)