Le kit DecaLabel Thermo Scientific de marquage de l’ADN est un système avancé destiné à la synthèse rapide de sondes d’ADN marquées radioactivement ayant une forte activité spécifique. Il est basé sur une méthode de multi-amorçage au hasard améliorée développée par Feinberg et Vogelstein.

La principale amélioration par rapport aux kits classiques de multi-amorçage aléatoire concerne l’utilisation d’amorces décamères aléatoires à la place d’amorces hexamères pour garantir une hybridation plus efficace de l’ADN à 37°C. En outre, le fragment Klenow, (exo-) a été génétiquement modifié pour éliminer l’activité de l’exonucléase. L’enzyme améliorée ne dégrade pas la sonde marquée au cours de la réaction et permet de nombreux marquages à partir de petites quantités de matrice d'ADN. Il est possible de marquer des fragments d’ADN de n'importe quelle longueur de façon uniforme. Deux mélanges pour les marquages sont fournis, ce qui permet d’utiliser au choix le dATP ou le dCTP marqué radioactivement.

Points clés

• Radioactive spécifique élevée des sondes : supérieure à 1 x 10⁹ dpm / µg d’ADN
• Rapide : 5 minutes à 37°C
• Rendements élevés avec le fragment Klenow, (exo) pas de dégradation d’une sonde marquée pendant la réaction
• Flexible : adapté au dATP ou dCTP marqué radioactivement

Applications

• Génération de sondes d’ADN marquées radioactivement, utilisables dans une large gamme d’expériences d’hybridation : Transferts de Southern et de Northern, hybridations sur colonies/plaques, transferts dot/slot et hybridations in situ.

Comprend

• Fragment Klenow, (exo-)
• Décanucléotides dans le tampon de réaction
• Mélange A (-dATP)
• Mélange C (-dCTP)
• dNTP Mix
•Modèle de contrôle
• Eau exempte de nucléase
• Protocole détaillé

Principe
Les décamères aléatoires sont hybridés sur un modèle d’ADN dénaturé, et les dNTPs marqués radioactivement sont ensuite incorporés dans de nouveaux brins d’ADN par fragment Klenow, (exo-) (voir la figure 1 dans les Données à l’appui).