Expressway™ Maxi Cell-Free E. coli Expression System

Le système d’expression d’E. coli sans cellule Expressway™ Maxi utilise une réaction de transcription/translation couplée efficace pour produire des quantités en milligrammes de protéines solubles et fonctionnellement actives en 4 à 6 heures. La procédure peut être effectuée dans un tube de réaction unique et est facilement évolutive sans avoir besoin d’équipements spécialisés. Les vecteurs d’expression TOPO TA Cloning™ (clonage en 5 min avec efficacité de 95 %) sont fournis pour des résultats d’expression optimaux. En plus de tous les avantages du système d’expression ouverte, la technologie Expressway™ Maxi permet de produire des niveaux élevés de protéines recombinantes qui peuvent être facilement détectées et purifiées pour diverses applications en aval.

Production de protéines en milligramme en 4 à 6 heures
La clé de la technologie Expressway™ Maxi est la formulation unique du tampon d’alimentation qui augmente la productivité de la réaction pour que plus d’un milligramme de protéines soit produit dans une réaction de 2 ml en 4 à 6 heures (Figure 1). La formulation du lysat permet la synthèse des protéines à l’aide des modèles linéaires ou circulaires.

Compatible avec le haut débit (HTP)
Ce système est également conçu pour l’expression HTP. Un kit est adapté à 200 x 50 réactions, pouvant être logées par 2 plaques à 96 puits. Sans tampon d’alimentation, ces réactions n’ont besoin que de deux heure’s. Une fois qu’une expression positive est détectée, la production de protéines à l’échelle peut être effectuée avec le grand format sans cellules Expressway™ ou dans des systèmes à base de cellules E. coli.

Vecteurs optimisés
Les vecteurs pEXP5 TOPO™ TA sont optimisés pour une utilisation dans le système Expressway™ Milligram (Figure 2). Ils sont conçus pour minimiser les séquences d’acides aminés supplémentaires qui peuvent interférer avec le repliement et la fonctionnalité des protéines natives. Les caractéristiques de ces vecteurs incluent :

• Le vecteur d’expression pEXP5-NT/TOPO™ fournit le marqueur d’histidine d’extrémité N-terminale et le site de reconnaissance de protéase TEV

• Le vecteur d’expression pEXP5-CT/TOPO™ peut être utilisé pour l’expression des protéines avec le marqueur d’histidine d’extrémité C-terminale ou pour l’expression de protéines natives en introduisant un codon d’arrêt à la fin de votre gène d’intérêt

Procédure simple et rapide
Le système d’expression sans cellules Expressway™ Maxi fournit tous les composants nécessaires pour une production optimale de protéines sans cellules. Le système comprend un extrait d’E. coli, un tampon de réaction IVPS, un tampon d’alimentation, un mélange enzymatique T7, un mélange de 19 acides aminés et des tubes individuels de méthionine. Pour commencer une réaction de 2 ml, mélangez le tampon de réaction, le mélange de 19 acides aminés, la méthionine et la cystéine marquées ou non marquées choisies, le mélange enzymatique T7 et votre modèle d’ADN (avec le promoteur T7) avec l’extrait d’E. coli. Après une incubation de 30 minutes, ajoutez le tampon d’alimentation. Les teneurs en milligrammes de protéines actives seront synthétisées en 4 à 6 heures. Pour exécuter l’expression HTP, prémélangez simplement tous les composants et l’aliquote dans un format HTP.