Système d’expression d’E. coli Expressway™ Tag-On-Demand™ sans cellules avec technologie Lumio™ permet l’expression in vitro pratique de protéines étiquetées ou non à partir d’un vecteur unique, la détection en temps réel de la synthèse protéique et la détection facile de protéines en gel. Ce système permet de :

• Sélectionner rapidement les niveaux d’expression des protéines de pleine longueur
• Économiser du temps et de l’effort en clonant une seule fois pour exprimer la protéine étiquetée ou native
• Exprimer une protéine étiquetée C-terminale à partir d’un clone ORF Ultimate™ dans un système in vitro

Le système Tag-On-Demand™ Expressway™ inclut un lysat d’E. coli spécialisé dérivé d’un mutant slyD pour la synthèse sans cellules. Ce lysat élimine la liaison non spécifique du réactif de Lumio™ Green à la protéine endogène SlyD, fournissant un arrière-plan optimal pour la détection des protéines recombinantes.

Fonctionnement
Clonez simplement votre gène d’intérêt contenant un codon d’arrêt TAG (ambré) dans le pEXP4-DEST fourni (Figure 1). Le vecteur pEXP4-DEST possède des sites attR pour une recombinaison Gateway™ efficace, l’étiquette Lumio™ C-terminal et 6  x étiquettes His pour une identification et une purification simplifiées, ainsi que des composants pour la synthèse de protéines sans cellules. En présence de l’ARNt suppresseur Tag-On-Demand™ Expressway™, le codon TAG n’est pas reconnu et la traduction se poursuit à travers l’étiquette Lumio™ et les 6 x étiquettes His. En l’absence de l’ARNt suppresseur, le codon d’arrêt TAG est reconnu et la protéine native est produite (figure 2). À partir du même vecteur, vous pouvez déterminer rapidement le niveau d’expression de la protéine C-terminale, pleine longueur, puis exprimer la protéine native exempte de tout effet indésirable que l’étiquette peut avoir sur sa structure, son activité ou ses interactions moléculaires.