T4 DNA Ligase는 double-stranded DNA와 3´ hydroxyl 및 5´ phosphate 말단 사이에 있는 ATP에서 phosphodiester 결합 형성 반응의 촉매 역할을 합니다. 특별히 조성된 T4 DNA Ligase buffer는 5분 내에 ligation이 완료될 수 있도록 최적화되어 있습니다(1). Single-stranded 핵산은 이 효소의 기질로 사용되지 않습니다. T4 DNA Ligase Technical Bulletin을 이용할 수 있습니다.

어플리케이션: Cloning (blunt-end 또는 cohesive-end ligation) (2). Linker 또는 adapter를 blunt-ended DNA에 결합 (2).

기원: E. coli œ lysogen NM989에서 정제.

성능 및 품질 검사: Endodeoxyribonuclease, 3´ 및 5´ exodeoxyribonuclease assays; ligation efficiency 검사 완료.

Unit 정의: 1 unit은 37°C에서 20분 내에 1 nmol ³²P-labeled pyrophosphate의 ATP로의 교환과정을 촉매합니다. (1 unit은 cohesive-end를 약 300개 ligation할 수 있는 양에 해당됩니다.)

Unit 반응 조건: 66 mM Tris-HCl (pH 7.6), 6.6 mM MgCl₂ , 10 mM DTT, 66 μM ATP, 3.3 μM 32 P-labeled pyrophosphate, enzyme 0.1 ml - 20분, 37°C.