T4 DNA Ligase는 double-stranded DNA와 3´ hydroxyl 및 5´ phosphate termini 사이에 있는 ATP에서 phosphodiester 결합 형성을 가수분해합니다. 고유한 T4 DNA Ligase buffer가 5분 내에 ligation을 최적화합니다(1). Single-stranded nucleic acid는 이 효소의 기질이 아닙니다. T4 DNA Ligase Technical Bulletin을 이용할 수 있습니다.

어플리케이션: Cloning (blunt-end 또는 cohesive-end ligation) (2). linker 또는 adapter를 blunt-ended DNA에 추가 (2).

기원: E. coli œ lysogen NM989에서 정제함.

성능 및 품질 검사: Endodeoxyribonuclease, 3´ 및 5´ exodeoxyribonuclease assays; ligation efficiency 검사 완료.

단위 정의: 1 단위가 37°C에서 20분 내에 1 nmol ³²P-labeled pyrophosphate을 ATP로 가수분해합니다. (1 단위는 cohesive-end ligation unit 약 300개에 해당합니다.)

단위 반응 조건: 66 mM Tris-HCl (pH 7.6), 6.6 mM MgCl₂ , 10 mM DTT, 66 μM ATP, 3.3 μM 32 P-labeled pyrophosphate, enzyme 0.1 ml - 20분, 37°C.