Thermo Scientific LightShift Chemiluminescent EMSA Kit는 EMSA(electrophoretic mobility shift assay)를 실행하여 단백질-DNA 결합 상호작용을 확인하고 특성을 분석하는 매우 견고하고 민감도 높은 시스템입니다. 이 키트에는 DNA 결합 상호작용을 설정하고 맞춤화하는 시약, 키트 시스템을 검사할 수 있는 DNA와 단백질 추출물로 구성된 대조군 세트, 비오틴이 표지된 DNA 표적을 프루빙(probing)할 수 있는 안정화된 streptavidin-HRP 접합체, 검출을 위한 매우 민감한 화학발광 기질 모듈이 들어 있습니다.

LightShift Chemiluminescent EMSA Kit의 특징:

• 핵 추출물에서 미량 단백질을 검출하는 우수한 성능
• 방사성 방식과 다이곡시제닌(digoxigenin) 방식보다 우수한 민감도
• 유명한 DNA-단백질 상호작용에 대해 이전에 수립한 결합 조건 적용 가능
• 신규 사용자가 우수한 분석법을 개발하고 결합 상호작용 특이성을 확인하는 데 사용되는 방법을 이해하는 데 유용한 EBNA 제어 시스템 포함

LightShift EMSA 검출 원리는 웨스턴 블롯(Western Blot)과 비슷합니다. 비오틴 말단 표지 duplex DNA는 핵 추출물이나 정제 인자를 사용해 배양되고 네이티브 겔에서 전기영동시킵니다. 그리고 나면 DNA는 신속하게(30분) 양의 나일론 막으로 전달되고, UV 교차연결되고, streptavidin-HRP 접합체로 조사되고 나서 기질을 사용해 배양됩니다. 표지부터 결과에 이르는 프로토콜을 단 하루만에 실시할 수 있습니다.

DNA와 단백질의 상호작용은 DNA 복제, 재조합 및 수복, 전사, 바이러스 어셈블리를 포함한 많은 세포 과정을 통제하는 데 있어 핵심적인 부분입니다. 유전자 조절 연구와 단백질:DNA 상호작용 확인에 핵심적인 한 가지 기법은 EMSA(electrophoretic mobility shift assay)입니다.

EMSA 기법은 비변성 polyacrylamide 또는 agarose 겔 전기영동을 적용하면 단백질:DNA 복합체가 자유 DNA 분자보다 느리게 이동한다는 관찰을 토대로 합니다. 단백질 결합 시 DNA 이동 속도는 바뀌거나 느려지기 때문에 이 분석을 겔 전이 또는 겔 지연 분석이라고도 합니다. EMSA의 개념이 정립되기 전에는 단백질:DNA 상호작용은 주로 nitrocellulose 필터-결합 분석을 사용해 연구되었습니다.

이 분석을 실시하려면 비오틴으로 말단 표지된 정제 DNA 표적, 검사할 단백질 추출물, 나일론 막(membrane), 기본 전기영동 장비만 있으면 됩니다. DNA 표적은 5' 또는 3' 비오틴 표지로 합성되거나 Thermo Scientific Biotin 3' End DNA Labeling Kit(제품 번호 89818)를 사용해 합성한 후 표지될 수 있습니다. 핵, 세포질, 전체 세포 단백질 추출물은 Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagent Kit(제품 번호 78833)를 비롯한 다양한 방법으로 채취할 수 있습니다.

관련 자료:

단백질-핵산 상호작용 기술 가이드
단백질-DNA 상호작용 검출 기술 가이드
겔 전이 분석(EMSA) 기술 가이드

관련 제품:
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Reagent Kit
Biodyne B Nylon Membrane for Chemiluminescent EMSA
Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Module
LightShift Chemiluminescent RNA EMSA Kit

추가 제품 데이터
• Pierce G2 Fast Blotter를 사용한 Transfer EMSA 겔