T7 Gene 6 Exonuclease는 올리고뉴클레오티드와 모노뉴클레오티드를 유리하여 약 50%의 DNA가 산 가용성이 될 때까지 비연작용 방식으로 이중 가닥 DNA를 5'-포스포릴 또는 5'-하이드록실 뉴클레오티드에서 5'→3' 방향으로 가수 분해합니다. 이 물질은 또한 5'-말단에서 나온 이중 가닥 DNA와 RNA:DNA 하이브리드에서 나온 RNA의 갭(gap)과 닉(nick)에서 5'→3' 방향으로 뉴클레오티드를 분해합니다.

T7 Gene 6 Exonuclease는 5' 모노뉴클레오티드를 유리하면서 5' 말단에서 나온 이중 가닥 DNA의 단계적 가수 분해를 촉매하기 때문에 람다 엑소뉴클레아제와 유사합니다. 하지만 람다 엑소뉴클레아제와 달리 이 효소는 연작용 특성이 낮고 5'-하이드록실과 5'-포스포릴 말단을 모두 제거합니다.

이는 또한 RNA:DNA 하이브리드의 RNA와 DNA를 5'→3' 방향으로 분해하지만 이중 가닥 또는 단일 가닥 RNA는 분해하지 못합니다.

이 효소는 염기서열분석 또는 SNP 분석을 위한 단일 가닥 DNA 템플릿을 생성하기 위해 사용되었습니다.

특성
분자량: 32kDa
최적 pH: 7.5
최적 온도: 37 °C
비활성: 75 °C에서 10분간 또는 50μL의 반응 부피를 얻기 위해 2μL의 0.5M EDTA 추가

비활성
75°C에서 10분간 가열 또는 50μL의 반응 부피를 얻기 위해 2μL의 0.5M EDTA 첨가

순도
SDS-PAGE에 의해 결정된 95%보다 높은 순도. 엔도뉴클레아제 및 리보핵산분해효소 오염에 대한 테스트 완료.

저장 완충액
50mM KPO₄(pH 6.5), 1mM EDTA, 1mM DTT, 50% 글리세롤

분석 조건
반응 혼합물(50μL)에는 50mM Tris-HCI(pH 8.1), 5mM MgCl₂, 20mM KCI, 5mM 2-메르캅토에탄올, 이중 가닥 DNA 및 효소가 포함되어 있습니다. 배양은 37°C에서 15분간 진행됩니다.

단위 정의
한 단위는 표준 분석 조건일 때 37°C에서 15분 내 1nmol의 산 가용성 뉴클레오티드를 방출하는 데 필요한 효소의 양입니다.

농도
50unit/μL

소스
T7 Gene 6 Exonuclease의 과다 생산 클론을 포함하는 E. coli 균주

기능 테스트
37°C에서 30분 내 75 단위의 효소에 의해 0.5pmol의 λ DNA를 단일 결합 절반 분자로 변환. 아가로스 젤 전기영동을 통한 검증.

애플리케이션:
  1. 5' 말단에서 이중 가닥 DNA의 조절된 단계적 분해
  2. 염기서열분석 또는 SNP 분석을 위한 ssDNA 템플릿 생성