Single-Stranded DNA Binding Protein(SSB)은 협력적 방식으로 단일 가닥 DNA에 높은 친화성으로 결합하며 이중 결합 DNA에는 잘 결합하지 않습니다. 단일 가닥 DNA에 결합 후, SSB는 이중 나선 구조를 불안정하게 만들어 DNA 중합효소가 기질에 더욱 쉽게 접근할 수 있도록 합니다. SSB는 in vivo에서 DNA 복제 및 재조합에 관여합니다. 또한 DNA 전자 현미경을 통해 단일 가닥 DNA를 시각화하는 데도 사용됩니다.

PCR은 이 결합 단백질을 반응에 첨가하여 최적화할 수 있습니다. SSB는 PCR 실험에서 변성 DNA를 안정화하기 위해 첨가할 수 있으며, PCR 반응에 첨가제 역할을 통해 뉴클레아제에 의해 ssDNA가 분해되지 않도록 보호할 수 있습니다. SSB는 가닥 변위 활성과 프라이머-템플릿의 친화성을 증가시켜 중합효소에 직접 또는 간접적으로 작용하여 까다로운 템플릿을 사용하는 PCR을 개선하는 것으로 나타났습니다.

또한 SSB는 RecA 단백질과 결합하여 부위 특이적 돌연변이 유도 및 이중 가닥 DNA 라이브러리에서 염기서열 선택에 사용됩니다. SSB는 PCR 산물의 제거 돌연변이 아티팩트를 최소화하여 PCR 수율을 향상시키는 것으로 나타났습니다.

SSB는 또한 DNA 염기서열분석 반응에 사용되는 특정 DNA 중합효소를 자극하며 이후 돌연변이 유도를 위해 제한 엔도뉴클레아제 분해를 단일 가닥 DNA의 특정 부위로 집중하는 데 사용됩니다.

SSB는 형광 편광 분석에 효과적인 것으로 나타났으며 강한 2차 구조에서 염기서열분석 시 일시 중지 시간을 제거해 줍니다. 가장 최근에 SSB는 SNP 분석을 위한 피로염기서열분석에서 더 긴 판독 길이를 얻도록 도움을 주기 위해 사용되었습니다.

특성
4개의 동일한 18.9kDa의 소단위로 구성
등전점: 6.0
단량체당 결합된 뉴클레오티드: 8-16
열안정성: SSB는 65°C에서 20분간 배양 후에도 활성도 유지.

순도
SDS-PAGE에 의해 결정된 95%보다 높은 순도. 비특이적 엔도뉴클레아제, 엑소뉴클레아제 및 리보핵산분해효소 오염에 대한 테스트 완료.

저장 완충액
50mM Tris-HCl(pH 7.5), 200mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1.0mM DTT, 50% 글리세롤.

활성
10mM MgCl₂ 첨가 시 1μg의 단일 가닥 DNA의 광학 밀도 변화를 방지하기 위해 약 5μg의 SSB 단백질이 필요합니다.

농도
5μg/µL; A₂₈₀

을 사용하여 측정소스
E. coli SSB 단백질의 과다 생산 클론을 포함하는 E. coli 균주.

애플리케이션:
  1. DNA 중합효소 활성의 증가
  2. 형광 편광 분석
  3. SNP 분석을 위한 피로염기서열분석에서 더 긴 판독 길이 확보 가능
  4. 강한 2차 구조를 가진 단일 및 이중 가닥 DNA 영역에 대한 염기서열분석 시 일시 중지 시간 제거
  5. 제한 효소 분해 개선
  6. recA와 결합하여 부위 특이적 돌연변이 유도