ExoSAP-IT™ PCR Product Cleanup의 특징 및 장점
• PCR 검체 보존 — 짧고 긴 PCR 산물 모두에 대한 100%의 회수율
• 한 개의 튜브/한 개의 단계를 사용한 PCR 세척 — ExoSAP-IT 시약을 직접 PCR 산물에 첨가
• 스핀 컬럼 제거 — 적은 시간과 비용으로 수율 증가
• 오염 플라이머와 dNTP 제거 — 다운스트림 애플리케이션에 간섭 없음
• 확장 가능성 — 고처리량 정제용으로 경제적
• 간단한 처리 — 자동화 공정으로 비드, 여과 장치 및 플레이트 대체
• 컬럼에 비해 더 적은 양의 폐기물 생성

ExoSAP-IT 시약은 DNA 염기서열분석 또는 단일 뉴클레오티드 다형성(SNP)과 같은 다운스트림 애플리케이션용으로 빠르고 간단한 PCR 세척을 위해 설계되었습니다. PCR 증폭이 완료되면 소모되지 않은 dNTP와 PCR 산물 속 혼합물에 남아 있는 프라이머가 이 방법에 간섭을 일으킵니다. ExoSAP-IT는 이러한 오염물을 제거합니다.

ExoSAP-IT는 PCR 산물에 직접 첨가되어 37°C에서 15분 동안 배양됩니다(그림 1). PCR 처리 후 ExoSAP-IT는 간단하게 80°C에서 15분 동안 가열하면 비활성화됩니다.

ExoSAP-IT 단일 단계 PCR 세척은 특별히 조성된 완충액에서 2가지 가수 분해 효소(Exonuclease I 및 Shrimp Alkaline Phosphatase(SAP))를 활용하여 PCR 산물에서 불필요한 dNTP와 프라이머를 제거합니다. Exonuclease I은 잔류 단일 가닥 프라이머와 PCR에서 생성된 모든 불필요한 단일 가닥 DNA를 제거합니다. SAP는 PCR 혼합물에서 잔류 dNTP를 제거합니다.

고속 PCR 산물 세척 프로토콜
ExoSAP-IT는 한 번의 피펫팅과 두 번의 배양 단계만 필요합니다. ExoSAP-IT 시약을 PCR 산물에 첨가하기만 하면 30분 내에 염기서열분석 또는 SNP 분석을 수행할 수 있습니다.

간단한 단일 단계
이 방법은 최소한의 ‘수작업’ 시간이 필요하도록 설계되었습니다. 효소에 의한 여분의 프라이머와 미결합 뉴클레오티드의 제거는 단일 튜브 또는 마이크로티터 웰에서 ExoSAP-IT 시약을 사용하여 한 번의 간편한 단계로 이루어집니다. 간단한 피펫팅으로 옮겨 담는 작업만 필요하기 때문에 많은 시료를 수동 또는 자동화 방법으로 한꺼번에 처리할 수 있습니다.

시료 손실 없음
ExoSAP-IT 시약을 사용하면 젤 또는 컬럼 정제, 침강, 여과, 비드 및/또는 자기 분리 과정이 모두 필요하지 않습니다. ExoSAP-IT를 사용한 경우 짧고 긴 PCR 산물 모두에 대한 회수율은 100%입니다(그림 2).

PCR 산물로부터 높은 데이터 품질 확보
ExoSAP-IT 시약은 형광 또는 방사선 DNA 염기서열분석, SNP 분석 또는 여분의 뉴클레오티드 및 프라이머가 없는 PCR 산물이 필요한 기타 모든 애플리케이션을 실시하기에 앞서 효과적인 세척 방법으로 사용할 수 있습니다.

참고 문헌:
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