HT ExoSAP-IT High-Throughput PCR Product Cleanup은 ExoSAP-IT 시약의 또 다른 조성으로서 고처리량, 자동 플랫폼 및 멀티채널 피펫의 고유한 요건을 만족하도록 특별히 설계되었습니다. HT ExoSAP-IT 시약은 더 높은 온도에서도 수명이 더 길고 자동 기계식 피펫팅에 사용할 수 있도록 점성이 낮습니다.

PCR Product Cleanup용 ExoSAP-IT(PN 78200)와 마찬가지로 HT ExoSAP-IT 시약은 Exonuclease I과 Shrimp Alkaline Phosphatase(SAP)의 혼합물이며, 단일 배양에서 PCR 반응 후 여분의 프라이머와 dNTP를 제거합니다. HT ExoSAP-IT 시약은 더 높은 열 안정성과 더 낮은 점성을 가지며 자동화된 96 및 384-well 구조에서 더욱 개선된 사용의 편리함을 제공합니다.

•한 개의 튜브만을 사용한 PCR 세척 — HT ExoSAP-IT 시약을 직접 PCR 산물에 첨가
•탁월한 정확도 — 긴 판독 길이에서도 고품질 데이터 제공
•10%의 시료 회수율 — 절편 크기에 상관 없이 PCR 산물의 손실 없음
•간단한 하나의 단계 — 비드 또는 컬럼 사용 시 동반되는 여러 단계 및 시간 낭비 대체
•고처리량 정제 — 점성이 낮은 조성으로 더욱 신속하게 결과를 얻을 수 있으며 이를 통해 자동 기계식 피페팅 가능
•여분의 프라이머 및 dNTP 제거 — 다음과 같은 다운스트림 애플리케이션에 간섭을 일으키지 않음
  – 염기서열분석
  – SNP 분석
  – 단일 염기 확장
  – 절편 분석
  – 시험관내 전사
•확장 가능성 — 5microL ∼ 5L
범위의 반응 부피 처리 •편리한 포장 — 96-well 플레이트에서 8개 튜브 스트립과 12개 스트립으로 제공
•8시간 동안 +25°C에서 안정적 — 완전한 기능적 활성도 유지 및 45°C에서 1주일간 안정적

HT ExoSAP-IT 시약은 직접 PCR 산물에 첨가되어 37°C에서 15분간 배양됩니다. PCR 처리 후 이 시약은 간단하게 15분 동안 80°C로 가열하면 비활성화됩니다. 당사의 고처리량 조성은 자동 기계식 피펫팅 및 멀티채널 피펫용으로 설계되었습니다. HT ExoSAP-IT 시약은 표준 혼합물보다 점성이 더 낮으며 8-튜브 스트립 형식에서 편리하게 사용할 수 있습니다.

HT ExoSAP-IT 시약은 특별히 조성된 완충액에서 2가지 가수 분해 효소(Exonuclease I 및 SAP)를 활용하여 PCR 산물에서 불필요한 dNTP와 프라이머를 제거합니다. Exonuclease I은 잔류 단일 가닥 프라이머와 PCR에서 생성된 모든 불필요한 단일 가닥 DNA를 제거합니다. SAP는 PCR 혼합물에서 잔류 dNTP를 제거합니다.

간단한 단일 단계
HT ExoSAP-IT 시약은 단 한 번의 피펫팅 단계와 2회의 배양만 필요합니다. HT ExoSAP-IT 시약을 PCR 산물에 첨가하기만 하면 30분 내에 염기서열분석, SNP 분석, 단일 염기 확장 또는 절편 분석을 수행할 수 있습니다. 효소에 의한 여분의 프라이머와 결합되지 않은 뉴클레오티드의 제거는 단일 튜브, 8-튜브 스트립 또는 96-well 낮은 스커트형 PCR 플레이트의 12 스트립에서 HT ExoSAP-IT 시약을 사용하여 한 번의 간편한 단계로 이루어집니다. 당사의 새로운 형식을 통해 이 시약은 자동화 장치와 함께 사용하기에 이상적인 제품입니다.

탁월한 정확도를 제공하는 HT ExoSAP-IT
HT ExoSAP-IT는 긴 판독 길이에서도 높은 품질의 데이터와 염기서열분석 정확도를 제공합니다. HT ExoSAP-IT로 처리된 PCR 산물의 염기서열 판독은 경쟁사 제품으로 처리된 시료보다 평균적으로 염기가 50+ 만큼 더 깁니다. 인간 게놈 DNA를 사용하여 1007bp 절편이 추출 오류 없이 서열분석되었습니다. 또 다른 PCR 세척 방법과 관련된 크기 제한은 HT ExoSAP-IT에는 해당되지 않습니다. 970bp 염기서열의 전체 길이에 걸쳐 프레드(Phred) 20 값은 HT ExoSAP-IT 처리 시료를 사용한 경우에는 822 ± 9였고 Agencourt™ AMPure™ XP로 처리한 시료를 사용한 경우에는 776 ± 83였습니다.

시료 손실 없음
HT ExoSAP-IT를 사용하면 젤 또는 컬럼 정제, 침강, 여과, 비드 및/또는 자기 분리 과정이 모두 필요하지 않습니다⁽¹⁾. HT ExoSAP-IT를 사용한 경우 짧고 긴 PCR 산물 모두에 대한 회수율은 100%입니다.

HT ExoSAP-IT로 처리된 PCR 산물의 높은 안정성
HT ExoSAP-IT 시약은 철저한 테스트와 엄격한 품질 관리 과정을 거칩니다. HT ExoSAP-IT로 처리한 PCR 산물을 24°C에서 1주일 동안 보관한 후에도 산물의 분해는 일어나지 않았습니다.

참고 문헌:
1. DUGAN, K. A., LAWRENCE, H. S., HARES, D. R., FISHER, C. L. AND BUDOWLE B. (2002) J. Forensic Sci 47, 811-818.
2. HANKE, M. AND WINK, M. (1994) BioTechniques 17, 858-860.
3. MU, J., DUAN, J., MAKOVA, K., JOY, D., HUYNH, C., BRANCH, O., LI, W. AND SU, X. (2002) Nature 418, 323-326.
4. SILVA, JR., W. A., COSTA, M. C. R., VALENTE, V., DE FREITAS SOUSA, J., PACÓ-LARSON, M. L., ESPREAFICO, E. M., CAMARGO, S. S., MONTEIRO, E., DE JESUS, A., HOLANDA, M. A., ZAGO, M. A., SIMPSON, A. J. G. AND NETO, E. D. (2001) BioTechniques 30, 537-542.
5. WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4354-4355.