Ambion® mMESSAGE mMACHINE™ T7 Ultra Kit는 새로운 캡형식—Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)와 Ambion의 특허 받은 high-yield transcription 기술을 통합해 translation 시 다른 trascript보다 단백질 수율이 높은 RNA transcript를 생성합니다. 이 kit에는 반응 50회에 충분한 시약이 들어있습니다.

• in vitro–transcribed RNA에서 보다 많은 단백질 합성
• in vitro와 in vivo 모두에서 효율적으로 RNA transcript 발현
• poly(A) tailing에서 포함된 시약으로 in vivo transcript 안정화

ARCA-capped RNA은 translation 활성이 높습니다.
ARCA의 base modification으로 기능적으로 translation이 가능한 방향으로만 통합됩니다. 기존 cap anaglog에서는 기능 방향과 비기능적 방향 모두로 통합될 수 있었습니다. 그렇기 때문에 ARCA를 transcription 반응에 통합시키면 capped RNA가 모두 100% translation 가능합니다. mMESSAGE mMACHINE™ T7 Ultra transcripts에 poly(A) tails이 들어 있어 이 기능이 더욱 강화됩니다. ARCA와 ARCA/poly(A) tailed transcripts을 cap analog 및 cap analog/poly(A) tailed transcripts와 비교하는 시험 결과 ARCA capped RNA의 단백질 합성 수준이 높았습니다 .

ARCA란?
Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)는 3' OH group (m7G 근접)이 OCH3 (구조 참조)로 바뀐 조작된 cap analog입니다. 이런 치환으로 RNA polymerase가 남아있는 hydroxyl group으로만 transcription을 시작할 수 있기 때문에 ARCA가 앞 쪽 방향으로 통합되게 합니다. 그래서 5' 말단에서 ARCA와 합성된 transcript은 100% 모두 translation이 가능하고 translation을 촉진하는 효과를 발휘합니다.

in vitro Transcribed RNA의 적절한 capping:
적절한 RNA capping은 단백질 합성의 올바른 시작과 mRNA의 in vivo 안전성 및 처리를 돕습니다 . Uncapped RNA는 세포 마이크로주입 또는 transfection 후 세포 RNase에 의해 빠르게 변성됩니다. Capped RNA는 일반적으로 in vitro translation 시스템에 보다 효율적으로 translation되며 기능 방향으로만 통합된 cap analog가 있는 RNA를 생성합니다. 그렇기 때문에 기존 cap analog를 ARCA으로 바꾸면 100% translation 가능한 capped RNA가 합성됩니다.