DAF-FM은 저농도 산화질소(NO) 검출과 정량에 사용하는 시약입니다. 이는 NO와 반응하여 형광 benzotriazole을 형성하기 전까지는 비형광 상태입니다. DAF-FM 형광은 유세포분석기, 현미경, 형광 마이크로플레이트 리더, 형광분석기 등 fluorescein을 검출할 수 있는 모든 기기로 검출할 수 있습니다.
DAF-FM 사양:
• DAF-FM의 Ex/Em: ∼495/515 nm • 동결건조 제품은 DMSO로 용해한 후 수성 버퍼에 넣어 작업액을 만들어야 합니다. • DAF-FM diacetate는 세포 투과성이고 세포막에 수동 확산되어 세포에 들어가면 세포 비투과성으로 바뀝니다. • bovine serum albumin (BSA) 및 phenol red가 함유된 버퍼는 형광에 영향을 미치기 때문에 주의해야 합니다. • DAF-FM의 형광 퀀텀 수율은 ∼0.005이나 NO와 반응한 후에는 ∼0.81로 160배 높아집니다.
DAF-FM 어플리케이션:
• 유세포분석으로 transaldolase 결핍 lymphoblasts에서 NO 산물 평가 • neurotrophin 자극 후 태아 피질 신경세포에서 NO 축적을 검출함 • zebrafish에서 NO의 in vivo 영상 촬영 • 마우스에서 신생혈관생성과 관련된 NO 생성을 생존 중 현미경 검출 • 토끼 구개열에서 ATP-유래 NO 방출을 정량함
DAF-2와 비교한 DAF-FM의 장점 DAF-FM의 NO 스펙트럼은 pH5.5 이상에서 독립적입니다. 또한 DAF-FM 의 NO adduct는 DAF-2 보다 광안정성이 유의하게 높아 영상 확보 시간이 연장됩니다. 마지막으로 DAF-FM는 DAF-2 보다 NO에 민감도가 높은 시약입니다(NO 검출 한계: DAF-FM ∼3 nM vs DAF-2 ∼5 nM).