Champion™ pET151 Directional TOPO™ Expression Kit with BL21 Star™ (DE3) One Shot™ Chemically Competent E. coli

Champion™ pET Expression System은 E. coli에서 최고 수준의 단백질 수율을 제공합니다. 발현 중 관심 단백질이 총 세포 단백질의 50% 이상에 달할 수 있습니다. 원래 Studier 연구진(1-3)이 개발한 T7 발현 vector를 기반으로 T7 RNA 중합효소가 native E. coli RNA 중합효소보다 진화되어 있고 관심 유전자 transcription에 맞게 만들어졌기 때문에 높은 수준의 발현이 달성됩니다. mRNA transcript의 안정성을 크게 개선하고 단백질 발현을 10배까지 높이는 발현 균주 BL21 Star™ E. coli를 이용하여 단백질 생산이 더욱 증가됩니다.

간편하고 효율적인 Directional TOPO™ 클로닝으로
Champion™ pET 발현 vector에 빠른 시간 안에 삽입될 수 있습니다. 이들 키트는 5분 만에 클로닝이 완료되는 topoisomerase I-activated Champion™ pET 발현 vector를 포함하고 있습니다. Directional TOPO™ Cloning 기술은 다음과 같은 이유로 유전자 발현을 촉진합니다.

• PCR시에 proof reading 기능을 가진 효소를 사용하여 클론 유전자의 오류를 줄입니다.

• 클론의 90% 이상이 유전자 발현에 맞는 방향으로 콜로니 스크리닝을 위한 시간이 단축됩니다.

7가지 Champion™ pET Directional TOPO™ Expression Vector를 이용할 수 있습니다(그림 1 및 표 1): 각 vector에는 고수준 발현을 위해 T7lac promoter 가 들어있습니다. 단백질 검출 단백질의 간편화, 정제 태그 제거, plasmid를 보유하고 있는 클론의 선택 및/또는 단백질 수율 개선을 위한 다양한 옵션을 이용할 수 있습니다.
Champion™ pET Directional TOPO™ vector를 사용하면 최고의 단백질 수율을 기대할 수 있습니다. 그림 2는 Champion™ pET Directional TOPO™ vector에서 lacZ 유전자의 발현을 나타냅니다. 그림 3은 pET151/D-TOPO™에서 발현되는 β-galactosidase 융합 단백질의 N 말단 태그의 TEV protease 를 사용한 효율적인 절단을 보여줍니다