La agarosa avidina monomérica Thermo Scientific Pierce es ideal para purificar proteínas biotiniladas, péptidos y otras moléculas.
Características de la agarosa avidina monomérica:
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No desnaturalizante: purifica los productos biotinilados utilizando condiciones de elución suaves (2 mM de biotina libre).
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Reutilizable: la agarosa avidina monomérica reutilizable puede regenerarse y reutilizarse al menos 10 veces, con una pérdida marginal en la capacidad de unión de biotina (disminución de aproximadamente el 2,5 % por regeneración).
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Específica: conserva la especificidad de la unión de biotina y la baja unión no específica de la avidina nativa.
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Flexibleenlace muestras de forma flexible en una variedad de tampones fisiológicos y elúyalas con 0,1 M de glicina o por competición con 2 mM de biotina.
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Buena capacidad de unión: superior a 1,2 mg de BSA biotinilada por ml de resina.
La proteína de avidina monomérica inmovilizada se une a la biotina con una alta especificidad y una afinidad moderada, permitiendo que las moléculas sin biotina se laven y que, a continuación, las moléculas marcadas con biotina enlazadas se eluyan de forma competitiva, al utilizar 2 mM de biotina en una solución salina tamponada con fosfato (PBS). La técnica facilita las condiciones de elución más suaves para la purificación de proteínas biotiniladas y evita tanto la contaminación como los demás problemas asociados con los métodos de avidina y estreptavidina tradicionales. La columna de avidina monomérica puede regenerarse utilizando 0,1 M de glicina para eliminar la columna de con enlace de biotina residual sin perder la capacidad de unirse a otra muestra biotinilada.
Con avidina o estreptavidina típica, la afinidad de unión de la biotina (Kd = 10
-15M) es tan grande que la purificación con estos medios tradicionales requiere de condiciones desnaturalizantes para la elución, como 8 M de guanidina·HCl con pH 1,5 o la ebullición en tampón de carga de muestra reductor para SDS-PAGE. Además de sus efectos adversos sobre la proteína biotinilada de interés, estas duras condiciones de elución suelen causar proteínas extrañas (es decir, subunidades de avidina o estreptavidina) que se eliminan de la resina y se eluyen conjuntamente con el producto de purificación deseado. En contraste, cuando la avidina se acopla a una resina (por ejemplo, agarosa granulada entrecruzada o resina UltraLink) como monómero de la subunidad, mantiene su especificidad para la biotina aunque su afinidad de unión con biotina disminuye a un nivel (Kd = 10
-8) que genera la elución subsiguiente.
Productos relacionadosKit de agarosa avidina monomérica Pierce™, 2 mlResina UltraLink™ de avidina monomérica Pierce™For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.