La resina de acoplamiento CarboxyLink Thermo Scientific se utiliza para la inmovilización covalente de péptidos u otras moléculas que contienen carboxilo (—COOH) en una resina porosa y con gránulos para su uso en procedimientos de purificación por afinidad.

La resina CarboxyLink es agarosa con gránulos entrecruzados que se ha activado con diamina-dipropilamina (DADPA) para que contenga brazos espaciadores largos, cada uno con una amina primaria al final. Cuando se incuban con la resina y el entrecruzador carbodiimida EDC (incluido en el kit de inmovilización CarboxyLink), las moléculas con contenido de carboxilo se conectan permanentemente al soporte por medio de uniones de amida estables. Una vez acoplada la molécula, la columna de afinidad preparada se puede utilizar varias veces en procedimientos de purificación por afinidad de proteínas típicos. Las resinas de acoplamiento CarboxyLink también se pueden utilizar para inmovilizar otros tipos de moléculas mediante químicos de entrecruzado alternativos y aminorreactivos.

Características de la resina de acoplamiento CarboxyLink:

• Resina de acoplamiento CarboxyLink: agarosa granulada al 4 % entrecruzada y activada con DADPA.
• Inmovilización eficaz: se puede acoplar a 1 o 2 mg de péptidos por mililitro de resina (resina de agarosa CarboxyLink activada con más de 16 µM de amina por mililitro de resina; DADPA en soporte UltraLink activado con más de 40 µM de amina por mililitro de resina).
• Vínculo estable: la inmovilización genera una unión covalente de grupos carboxilo mediante enlaces de amida, lo que permite llevar a cabo múltiples rondas de purificación por afinidad con un lote de resina preparada.
• Condiciones de acoplamiento flexibles y suaves: reacción de inmovilización completada en un tampón MES o de otro tipo, casi neutro, sin aminas y sin carboxilos, con o sin disolvente orgánico.
• Ideal para péptidos sin modificar: inmoviliza los péptidos con alta capacidad y diversas orientaciones sin generar impedimentos estéricos, lo que permite un uso eficaz en la purificación por afinidad de anticuerpos específicos.

Como el EDC entrecruza carboxilatos con aminas primarias, los péptidos y otras moléculas que contienen ambos grupos funcionales se polimerizarán de forma diversa y se inmovilizarán en la resina CarboxyLink. En el caso de los péptidos cuyos únicos grupos carboxilo y amino están en el terminal, el acoplamiento con el kit CarboxyLink da como resultado cadenas de péptidos de extremo a extremo que están vinculadas por sus extremos de C-terminal al soporte. En general, esta estructura proporciona una alta capacidad y un bajo impedimento estérico para su uso en la purificación por afinidad. Sin embargo, en el caso de los péptidos que contienen múltiples aminas primarias (lisina) o carboxilatos (ácido glutámico y aspártico) en el medio de su secuencia, el método de acoplamiento CarboxyLink puede provocar el bloqueo de los puntos de unión clave, lo que da como resultado una alta capacidad de acoplamiento y una capacidad de unión deficiente para la purificación por afinidad. Entre los métodos alternativos para la inmovilización se incluyen la resina de acoplamiento AminoLink Plus, el biosoporte UltraLink y la resina de acoplamiento SulfoLink.

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