El kit FirstChoice™ RLM-RACE está diseñado para amplificar únicamente ADN complementario (ADNc) a partir de ARNm con caperuza de longitud completa, lo que normalmente produce una sola banda tras la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Este kit es una mejora enorme con respecto a la amplificación rápida y básica del protocolo de extremos de ADNc (RACE). El procedimiento RLM-RACE selecciona solo ARNm de longitud completa pero no ARNr, ARNt o ARN degradado y facilita la clonación de secuencias a partir de los extremos 5' de mensajes.

Características del kit FirstChoice™ RLM-RACE:

• De ARN a producto de PCR en menos de un día
• Genera un producto único y específico a partir de transcritos raros
• Selecciona extremos 5' y/o 3' de mensajes reales
• Eficaz: todas las reacciones enzimáticas están optimizadas para garantizar la detección de incluso el ARNm más raro

RACE
La amplificación rápida de extremos de ADNc (5'-RACE) es una técnica basada en la reacción en cadena de la polimerasa desarrollada para facilitar la clonación de secuencia a partir de los extremos 5' de mensajes El kit FirstChoice™ RLM-RACE es una enorme mejora con respecto al protocolo RACE básico.

Selección de ARNm de longitud completa pero no de ARNr, ARNt o ARNm degradado
En el procedimiento FirstChoice™ RLM-RACE, se seleccionan ARNm de longitud completa mediante el tratamiento de ARN total o poli(A) con fosfatasa intestinal bovina (CIP) para retirar el 5'-fosfato de todas las moléculas que contienen 5'-fosfatos libres (ARN ribosómico, ARNm fragmentado, ARNt y ADN genómico contaminante). Los ARNm de longitud completa no se ven afectados. A continuación, se trata el ARN con pirofosfatasa ácida de tabaco (TAP) para retirar la estructura de caperuza del ARNm de longitud completa dejando un 5'-monofosfato. Se liga un adaptador de ARN sintético a la población de ARN: solo las moléculas que contienen 5'-fosfato, los ARNm de longitud completa y sin caperuza, aceptarán el adaptador. A continuación, se realizan reacciones de transcripción inversa y PCR anidada, cebadas de forma aleatoria, con el fin de amplificar el extremo 5' del transcrito específico.

De ARN a PCR en menos de un día
Cada paso del procedimiento FirstChoice™ RLM-RACE se ha optimizado para que pueda completar todas las reacciones enzimáticas e incluso iniciar la PCR en tan solo cinco horas El kit FirstChoice™ RLM-RACE contiene reactivos y enzimas para producir 5 preparaciones de ADNc listo para RLM-RACE, además de primers y primers de adaptador RACE anidados para 100 reacciones de PCR. También se incluyen reactivos de transcripción inversa. Cada kit contiene primers y ARN de control para probar el rendimiento del kit junto con un manual de instrucciones detallado. La ADN polimerasa Taq termoestable SuperTaq™ está disponible por separado. Para una amplificación óptima de fragmentos ≥1 kb, utilice SuperTaq-Plus. También incluye un adaptador de 3' RACE y primers para 3' RACE.