La polimerasa de ADN Thermo Scientific phi29 es una polimerasa altamente procesiva (hasta más de 70 kb) que presenta una fuerte actividad de desplazamiento de la cadena, lo que permite una amplificación isotérmica de ADN muy eficaz. La polimerasa de ADN phi29 también posee una actividad exonucleasa (corrección) de 3’ → 5' que actúa preferentemente en ADN monocatenario o ARN. Por lo tanto, se recomienda encarecidamente la utilización de primers modificados de 3'.

Aspectos destacados

• Una mayor actividad procesiva y de desplazamiento de hebras entre las ADN polimerasas conocidas: se pueden sintetizar más de 70 kb de tramos de ADN
• Síntesis de ADN muy precisa
• Producción extremadamente alta de ADN amplificado incluso a partir de cantidades diminutas de plantilla
• Los productos de amplificación se pueden utilizar directamente en aplicaciones posteriores (PCR, digestión restrictiva, identificación de genotipos de SNP, etc.)

Aplicaciones

• Amplificación de círculo rodante (RCA): generación de nanoplantillas de ADN periódicas
• Amplificación de desplazamiento múltiple (MDA)
• Amplificación neutral del genoma completo (WGA, ver figura 1 en datos de apoyo):
• Amplificación de ADN para la detección de SNP y STR
• Amplificación sin células de ADN a partir de células individuales
• Organismos patógenos o metagenomas
• Amplificación de ADN a partir de muestras de manchas de sangre en papel de filtro
• Preparación de plantillas de ADN para secuenciación
• Amplificación de ADN con primado de proteínas
• Genotipado in situ con sondas candado
Clonación basada en recombinación
• Clonación de ADN letal sin células
• Amplificación de ADN primado de ARN

Nota

La adición de pirofosfosfatasa a la mezcla de reacción con ADN polimerasa phi29 puede mejorar la síntesis de ADN.

El uso de esta enzima en determinadas aplicaciones puede estar asegurado por patentes y puede requerir una licencia.