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MagicMark™ XP Western Protein Standardによりブロット上のタンパク質マーカーバンドを直接、可視化することが可能です。タンパク質修飾や特別な検出試薬を必要としません。MagicMark™ XP Western Standardタンパク質は、IgG結合部位を形成する融合タンパク質として、E. coliを用いて組換え合成しています。
主な特徴は以下の通りです：
仕様
主な特徴は以下の通りです：
- MagicMark ™ XPは 20～200 kDaの範囲の9個の組換えタンパク質からなります
- ウェスタンブロッティングにおける分子量の推定に適しています
- ready-to-useフォーマットで提供されます
- アルカリホスファターゼまたはペルオキシダーゼに対応する、発色、化学発光、蛍光のいずれの検出試薬でも利用できます
- SimplyBlue™ SafeStainまたは他のCoomassie®染色を用いてSDS- PAGEゲル上でも可視化できます
仕様
- 内容物: 250 µl のMagicMark™ XP Western Protein Standard
- ストレージバッファ: 125 mM Tris-HCl、 pH 6.8；10 mM DTT； 17.4% グリセロール； 3% SDS； および 0.025% ブロモフェノールブルー
- 保存: -20°Cで保存凍結融解の繰り返しを避けるため、少量に分けて保存。
Ordering Information
MagicMark™ XP Western Protein Standardはready-to-useフォーマットで提供されます。泳動前に加熱や還元処理を行う必要はありません。
- 適切なSDS -PAGEミニゲル上に2～10 µlのStandardをセットして下さい。 お客様の実験条件に最適な量を決めるため、異なる量でテストすることをお勧めします。
- サンプルをセットし、電気泳動を実行して下さい。
Standardの至適量は、お客様の抗体の種類や検出システムの感度で異なります。
ブロッティング
MagicMark™ XP Western Standard タンパク質の移動度は、事前に染色されたマーカーや未染色のマーカーと一致しない場合があります。
染色
SimplyBlue ™ SafeStainまたは他のCoomassie®色素を用いてゲルを染色した後、ゲルを脱色します。
SeeBlue® Pre-stained Standard
とのプレミクシング電気泳動をモニターするため、 5 µlのSeeBlue® Pre-stained Standard (カタログ番号 LC5625)と10 µl のMagicMark ™ XPWestern Standard をプレミックスします。
- 適切な膜にタンパク質を転写して下さい。
- ブロットのブロッキング、一次抗体のインキュベーションおよび（必要に応じて）二次抗体インキュベーションのステップを行います。
- メーカー推奨の発色、化学発光、または蛍光検出システムを用いてタンパク質を可視化します。 検出後、タンパク質マーカーバンドを確認して下さい。
MagicMark™ XP Western Standard タンパク質の移動度は、事前に染色されたマーカーや未染色のマーカーと一致しない場合があります。
染色
SimplyBlue ™ SafeStainまたは他のCoomassie®色素を用いてゲルを染色した後、ゲルを脱色します。
SeeBlue® Pre-stained Standard
とのプレミクシング電気泳動をモニターするため、 5 µlのSeeBlue® Pre-stained Standard (カタログ番号 LC5625)と10 µl のMagicMark ™ XPWestern Standard をプレミックスします。
電気泳動をモニターするため、 5 µlのSeeBlue® Pre-stained Standard (カタログ番号 LC5625)と10 µl のMagicMark ™ XPWestern Standard をプレミックスします。
種類 | MagicMark™のアフィニティー |
ヒト、ウマ、ウシ
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++++
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ブタ、ウサギ
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+++
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ヤギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ラット、マウス
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++
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ニワトリ
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+
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5 µl のMagicMark™ XP Western Protein Standard を NuPAGE®４～12％ Novex 4-12% Bis-Tris Gel (A) またはNovex® 4-20% Tris-Glycine gel (B)上に泳動し、ニトロセルロース膜上にブロットし、WesternBreeze® Anti-Rabbit Chemiluminescent Kitを用いて検出しました。
Western SMagicMark™ Western Standardを用いた実験のトラブルシューティングについては以下の情報を参照下さい。For troubleshooting Western blotting and detection, refer to the manufacturer’s recommendations.
問題
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原因
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対処方法
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シグナルが弱いまたはない
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検出試薬がワークしない
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検出試薬が適切にワークしているか確認します。最良の結果を得るため抗体濃度を至適化します。
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使用するStandardの量が少ない
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より多くの量のStandardをゲル上に泳動させます。
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転写が悪い、または不完全
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転写条件を至適化します。
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酵素標識抗体がMagicMark ™タンパク質に効率的に結合しないことがあります
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未修飾の一次抗体を使用後、酵素結合二次抗体を添加して下さい。注意：弊社の Anti-myc-AP/HRPおよびAnti-V5-AP/HRP AntibodiesはMagicMark™ タンパク質に結合しません。
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スメアまたは不明瞭なバンド
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量が多すぎる
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Standardの量を減らします。
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抗体の濃度が高すぎる
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メーカー推奨の希釈にするか、ドットブロッティングにより、最適な抗体濃度を決めます。
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LC5600.pps MAN0001518 12-May-2010