La proteína G recombinante purificada (no conjugada) Thermo Scientific Pierce es útil como base para preparar varios tipos de sondas o medios de afinidad para la detección o purificación de anticuerpos humanos y de conejo, especialmente isotipos de IgG, en inmunoensayos y protocolos de purificación de anticuerpos.

Características de la proteína G recombinante:

• Contiene dos dominios de unión Fc por proteína
•Mejor que la proteína A para ratón (incluida IgG1), humano (incluida IgG3) y anticuerpos de rata, cabra y vaca
• Más pobre que la proteína A para cobaya, cerdo, perro y gato
• No enlaza IgM, IgD o IgA humanas

La proteína G es un aislamiento de proteínas de pared celular bacteriana del grupo G estreptococo. La secuenciación del ADN de la proteína G nativa identifica dos dominios de unión de IgG y sitios para la unión de albúmina y superficie celular. Los dominios de unión de la albúmina y la superficie celular se han eliminado de la proteína G recombinante para reducir la unión no específica y, por lo tanto, se pueden utilizar para separar IgG de muestras brutas. La unión óptima se realiza a un PH de 5, aunque la unión también es efectiva a pH 7,0 y 7,2.

Propiedades de la proteína recombinante G:
• Fuente: E. coli
• Peso molecular: 21.600 (MW aparente por SDS-PAGE: 32 000)
• Forma: polvo sin sal
• A280 de solución al 0,1 %: 1,0
• Punto isoeléctrico (PI): 4,5

Dado que la proteína G tiene mayor afinidad que la proteína A para la mayoría de los IgG de mamíferos, puede usarse para la purificación de IgG de mamíferos que no enlazan bien con la proteína A. La proteína G se une con una capacidad significativamente mayor que la proteína A a varias subclases de IgG, como la IgG3 humana, IgG1 de ratón y IgG2a de rata. Sin embargo, la proteína G no se une a las IgM, IgD e IgA humanas. Las diferencias en las características de unión entre la proteína A y la proteína G pueden explicarse por las diferentes composiciones en los lugares de unión de IgG de cada proteína. Las estructuras terciarias de estas proteínas son muy similares, aunque sus composiciones de aminoácidos son significativamente diferentes.

Hay incoherencias en las propiedades de unión de IgG a proteína G. Las variaciones en los métodos de aislamiento y fabricación de proteína G pueden afectar a la unión de IgG, en parte porque hay diferentes números de lugares de unión de IgG en diversas fuentes de proteína G. Se han realizado estudios de unión utilizando proteína G nativa y varias formas recombinantes diferentes. Se han utilizado varios métodos de ensayo para determinar la afinidad relativa, incluidos los experimentos de radiomarcado y las técnicas ELISA. Los diferentes ensayos de afinidad pueden explicar algunas de las inconsistencias. Además, existen diferencias significativas de unión cuando se utilizan diferentes tampones. Aproximadamente un 44 % más de IgG del suero de rata unido a la proteína G cuando se ha usado tampón de unión de proteína G en comparación con el tampón Tris de 20 mM a pH 7,5.

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