Purified (unconjugated) Thermo Scientific Pierce Recombinant Protein G es útil como base para preparar varios tipos de sondas o medios de afinidad para la detección o purificación de anticuerpos de conejo y seres humanos, especialmente isotipos de IgG, en inmunoensayos y protocolos de purificación de anticuerpos.

Características de la proteína G recombinante:

• Contiene dos dominios de unión Fc por proteína
• Mejor que la proteína A para ratón (incl. IgG1), ser humano (incl. IgG3) y anticuerpos de rata, cabra y vaca
• Peor que la proteína A para cobaya, cerdo, perro y gato
• No se une a IgM, IgD o IgA humanas

La proteína G es una proteína de la pared celular bacteriana aislada del grupo G Streptococci. La secuenciación del ADN de la proteína G nativa identifica dos dominios de unión de IgG y sitios para la unión de albúmina y superficie celular. Los dominios de unión de albúmina y superficie celular se han eliminado de la proteína G recombinante para reducir la unión no específica y, por tanto, se pueden utilizar para separar IgG de muestras brutas. La unión óptima se produce a pH 5, aunque la unión también es efectiva a un pH de 7,0 a 7,2.

Propiedades de la proteína G recombinante:
• Fuente: E. coli
• Peso molecular: ∼21 600 (MW aparente por SDS-PAGE: 32 000)
• Forma: polvo sin sal
• A280 de solución al 0,1 %: 1,0
• Punto isoeléctrico (pI): 4,5

Dado que la proteína G tiene mayor afinidad que la proteína A para la mayoría de los IgGs de mamíferos, puede utilizarse para la purificación de IgGs de mamíferos que no se unen bien a la proteína A. La proteína G se une con una capacidad significativamente mayor que la proteína A a varias subclases de IgG, como la IgG3 humana, la IgG1 de ratón y IgG2a de rata. Sin embargo, la proteína G no se une a las IgM, IgD e IgA humanas. Las diferencias en las características de unión entre la proteína A y la proteína G pueden explicarse por las diferentes composiciones en los sitios de unión de IgG de cada proteína. Las estructuras terciarias de estas proteínas son muy similares, aunque sus composiciones de aminoácidos son significativamente diferentes.

Hay incoherencias en las propiedades de unión de IgG a la proteína G. Las variaciones en los métodos de aislamiento y fabricación de la proteína G pueden afectar a la unión de IgG, en parte porque existen diferentes números de sitios de unión de IgG en diversas fuentes de proteína G. Se han realizado estudios de unión utilizando proteína G nativa y varias formas recombinantes diferentes. Se han utilizado varios métodos de ensayo para determinar la afinidad relativa, incluyendo experimentos de marcado radioactivo y técnicas ELISA. Los diferentes ensayos de afinidad pueden explicar algunas de las incoherencias. Además, existen diferencias significativas de unión cuando se utilizan diferentes tampones. Aproximadamente un 44 % más de IgG del suero de rata unida a la proteína G cuando se utilizó el tampón de unión a la proteína G en comparación con el tampón Tris de 20 mM, pH 7,5.

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