GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System

Das GeneArt™ ortsspezifische Mutagenese-System bietet eine moderne, einfache, praktische und sehr effiziente Möglichkeit zur Generierung von Mutationen auf einem Zielkonstrukt in vitro in weniger als drei Stunden. Dieses System ersetzt das beliebte GeneTailor™ Site-Directed Mutagenesis System und wurde komplett überarbeitet, um eines der führenden Produkte für die zielgerichtete Mutagenese zu sein, die gegenwärtig auf dem Markt erhältlich sind. Dieses Produkt bringt unsere Mutagenese-Technologie auf die nächste Stufe. Hinweis: Ein PCR-Enzym ist nicht im Lieferumfang des Systems enthalten und muss separat erworben werden. Das empfohlene Enzym für dieses Kit ist AccuPrime™ Pfx-DNA-Polymerase.

• Leistungsstark – Austausch, Deletion und Einfügen von bis zu 12 Nukleotiden in Plasmiden mit bis zu 14 kb
• Effizient – Mutation gelingt gleich beim ersten Versuch; über 90 % richtige Mutanten in einem Plasmid mit 3 kb
• Schnell – Mutierte Plasmid-DNA ist in weniger als 3 Stunden erhältlich, hergestellt mit einem einfachen Protokoll mit minimalem Arbeitsaufwand
• Vielseitig – Verwenden Sie Plasmide unterschiedlicher Größe sowie isolierte DNA aus jeder beliebigen Quelle; keine speziellen Vektoren, Wirtsstämme oder Restriktionsstellen erforderlich

Einfache Erstellung gewünschter Mutanten
Die Erstellung von Mutanten mit dem GeneArt™ ortsspezifischen Mutagenesesystem stützt sich auf die inhärenten Eigenschaften von DNA-Methylase, High-Fidelity DNA-Polymerase, von Rekombinationsenzymen und der nativen McrBC-Endonuklease von E. coli. Einfach die gewünschte Mutation oder Mutationen (bis zu 12 Nukleotide) in Primer integrieren, und nach der PCR, Rekombination und Transformation erhalten Sie Vektoren, die mit einer Effizienz von bis zu 90 % ausschließlich die benötigten Mutationen aufweisen. Der Modell-Vektor, dem Sie Mutationen hinzufügen, kann aus einer beliebigen Quelle isoliert werden und eine Größe von bis zu 14 kb haben. Zur Erstellung vollständiger Konstrukte oder zum Zusammenfügen großer Stücke unabhängiger DNA siehe unser GeneArt™ Seamless Cloning and Assembly Kit (Bestell-Nr. A13288) oder unser GeneArt™ High-Order Gen-Assemblierungssystem (Kat.-Nr. A13286).

Optimiertes Mutagenese-Protokoll
Das GeneArt™ ortsgerichtete Mutagenese-System wurde für Effizienz und Einfachheit optimiert. DNA-Methylierung und -Amplifikation wurden in einer einzigen Reaktion kombiniert, sodass die Notwendigkeit eines In-vitro-DpnI-Verdaus entfällt. Nach Methylierung und Amplifikation wird in einer 10-minütigen In-vitro-Rekombinationsreaktion der amplifizierten PCR-Produkte der Kolonien-Output um das 3- bis 10-Fache erhöht und die Effizienz der Mutagenese damit gesteigert. Bei einer endgültigen Transformation der mutierten DNA in DH5α™ E. coli-Zellen wird die methylierte parentale DNA komplett verdaut, sodass nur das intakte unmethylierte Reaktionsprodukt der Mutagenese zurückbleibt. Keine Reinigungsschritte oder zusätzlichen Aufschlüsselungen nötig. Einzelne Kolonien können am folgenden Tag verwendet werden, um Mutationen zu überprüfen.