CellEvent™ Caspase-3/7 Detection Reagents
CellEvent™ Caspase-3/7 Detection Reagents
Invitrogen™

CellEvent™ Caspase-3/7 Detection Reagents

CellEvent Caspase-3/7-Nachweisreagenzien sind neuartige fluorogene Substrate für den Apoptosenachweis. Diese Substrate weisen aktivierte Caspase-3/7 in lebenden Zellen nach, die sich durch Arbeitsabläufen zum Antikörpernachweis fixieren und multiplexen lassen.
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KatalognummerMengeFarbeAnregung/EmissiondimFormat
C104231 x 100 μl-FläschchenGrün∼ 502/530 nm
C104301 FläschchenRot∼590/610 nm
C104315 FläschchenRot∼ 590/610 nm
C104321 FläschchenGrün∼502/530 nm
C104335 FläschchenGrün∼ 502/530 nm
C104342 Fläschchen (1 Green, 1 Red)Rot, grün∼ 590/610 nm, ∼ 502/530 nm
C107231 x 25 µl-FläschchenGrün∼ 502/530 nm
Katalognummer C10423
Preis (EUR)
844,65
Online Exclusive
882,00
Ersparnis 37,35 (4%)
Each
-
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Menge:
1 x 100 μl-Fläschchen
Farbe:
Grün
Anregung/Emission:
∼ 502/530 nm
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CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün und CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot sind neuartige fluorogene Substrate für aktivierte Caspase-3/7 in lebenden Zellen, die sich mit Arbeitsabläufen für den Antikörpernachweis wie Immunfluoreszenz (IF) und Immunozytochemie (ICC) fixieren und multiplexen lassen. Aktivierung von Caspase-3 ist ein Ereignis während der Apoptose, was diese zu optimierten Reagenzien für die Analyse apoptotischer Zellen macht. CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot ist auch zum Nachweis von Apoptose in GFP exprimierenden Zellen einsetzbar.

Leistungsmerkmale dieser Indikatoren sind:
• Optimiertes Caspase-3/7-Substrat für die Apoptose-Analyse
• Einfach zu verwenden – Hinzugeben und ablesen; keine Zelllyse erforderlich
• Verwendung für Zeitverlaufsmessungen; einfache Auswahl des gewünschten Zeitpunkts
• Kompatibel mit Live-Zellfluoreszenz-Bildgebung und Formaldehyd-basierten Fixiermethoden
• Multiplex-fähig – In Kombination mit anderen fluoreszierenden Reagenzien zur Bestätigung der Apoptose in derselben Zelle oder Zellpopulation

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün: ∼502/530 nm Absorptions-/Emissionsmaxima. Mit dem herkömmlichen FITC/GFP-Filtersatz nachweisbar.

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot: ∼590/610 nm Absorptions-/Emissionsmaxima. Mit dem herkömmlichen Texas Red-Filtersatz nachweisbar.

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot und CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün werden als Trockenpulver geliefert. Einfach 100 μl PBS zu Trockenpulver zugeben und so eine 100 x-Stammlösung erzeugen. Diese 100 x-Stammlösung dann 1:100 in Komplettmedium verdünnen, Zellen 30 bis 60 Minuten lang färben und Sie unter dem Fluoreszenzmikroskop analysieren.

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot wird auch als bereits vorbereitete DMSO-Lösung geliefert. Die DMSO-Lösung ist eine gebrauchsfertige 400 x-Stammlösung. Einfach in Wachstumsmedien 1:400 verdünnen und Zellen dann 30 bis 60 Minuten lang färben.

Zum Verhindern des Auswaschens apoptotischer Zellen ist am Ende der Färbephase kein Waschen erforderlich. Gefärbte Zellen können in Echtzeit analysiert oder mit 4%iger Paraformaldehydlösung wie Image-IT™ Paraformaldehyd 4 % in 0,1 mol Phosphatpuffer, pH-Wert 7,4, Kat.- Nr. I28800 fixiert werden. Diese fixierten Zellen lassen sich für den ICC-Arbeitsablauf weiterverarbeiten.

Substratspezifika
CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenzien bestehen aus einem Nukleinsäure bindenden Farbstoff, der mit einem aus vier Aminosäuren bestehenden Peptid (DEVD) konjugiert ist. Die DEVD-Peptidsequenz ist eine Spaltstelle für Caspase-3/7, und der konjugierte Farbstoff fluoresziert erst, nach seiner Trennung vom Peptid und der Bindung an DNA.

Wirkprinzipien
CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün ist intrinsisch nicht fluoreszierend, da das DEVD-Peptid die Fähigkeit des Farbstoffs zur Bindung an DNA hemmt. Nach der Aktivierung von Caspase-3/7 in apoptotischen Zellen wird das DEVD-Peptid jedoch gespalten, wodurch sich der Farbstoff an DNA binden und eine helle fluorogene Reaktion erzeugen kann.

Einfaches Protokoll in drei Schritten
Zur Verwendung von CellEvent Caspase 3/7 Nachweisreagenz dieses einfach zu den Zellen zugeben, 30 bis 60 Minuten lang inkubieren und dann visualisieren. Apoptotische Zellen mit aktivierter Caspase-3/7 haben hellgrüne bzw. hellrote Zellkerne, während Zellen ohne aktivierte Caspase 3/7 ein minimales Fluoreszenzsignal aufweisen.

Die Assay-Vielseitigkeit ermöglicht die Erkennung und Fixierung von lebenden Zellen
Dieser robuste Assay gestattet die Untersuchung der Caspase-3/7-Aktivierung in lebenden Zellen. Da für die Erkennung keine Waschschritte erforderlich sind, bleiben fragile apoptotische Zellen, die bei Waschschritten in der Regel verloren gehen, erhalten. Wichtig ist auch, dass das Fluoreszenzsignal des CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz' die Fixierung und Permeabilisierung übersteht. Das gibt dem Anwender die Flexibilität, Endpunkt-Assays durchzuführen und mittels Immunzytochemie auf anderen Proteinen von Interesse zu prüfen.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Specifications
FarbeGrün
Anregung/Emission∼ 502/530 nm
Zur Verwendung mit (Geräte)Fluoreszenzmikroskop, High Content Gerät
Zusammensetzung2 mM in DMSO
Inkubationszeit30 min
MarkertypAndere Labels oder Farbstoffe
ProduktlinieCellEvent™
ProdukttypCaspase 3/7 Grün Nachweisreagenz
Menge1 x 100 μl-Fläschchen
Reaktionszeit30 min
VersandbedingungRaumtemperatur
KonjugatCellEvent™ Caspase 3/7 Grün
NachweisverfahrenFluoreszenz
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
100 μl, 2 mM Lösung in DMSO. Bei ≤ -20 °C getrocknet und vor Licht geschützt aufbewahren.
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I used Image-iT FX Signal Enhancer solution to get rid of nonspecific nuclear labeling with Alexa Fluor 568 secondary antibody, but I also saw a significant reduction in my specific mitochondrial antibody labeling. Why is this and what can I do?
Can I use the Image-iT FX Signal Enhancer instead of my normal blocking solution (BSA or serum)?
I am labeling fixed and permeabilized cultured cells with an Alexa Fluor secondary antibody. My secondary-only control is showing nuclear and mitochondrial labeling, even though I did a thorough protein blocking and tried a concentration range. What can be done to minimize this non-specific binding?
I am seeing non-specific binding in the nuclei and mitochondria of my cells with a secondary-only control, but protein binding isn't enough to stop it. What can I do?
I used a neuron-specific antibody to label my neurons. How can I reduce non-specific antibody binding?
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Fluorescence spectra

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Zertifikate

Chargen-Nr.Certificate TypeDateCatalog Number(s)
3163254Certificate of Analysis13. Mai 2025C10432
3143137Certificate of Analysis03. Apr. 2025C10423
3101044Certificate of Analysis07. Dez. 2024C10430
3050008Certificate of Analysis21. Nov. 2024C10430
3006760Certificate of Analysis02. Okt. 2024C10432
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Sicherheitsdatenblätter

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

Yes, on both accounts. We have demonstrated that it works for microplates, and we have multiplexed the dye with PrestoBlue Cell Viability Reagent. Some microplates may be less sensitive than microscopic analysis, so sensitivity may not be the same for the CellEvent reagent.

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It has been done, but we don‘t recommend it. Both healthy cells and apoptotic cells possess phosphatidylserine on the cell surface, which can be detected with Annexin V, but apoptotic cells have significantly more of it. You can easily tell the difference between these two populations with flow cytometry, because flow cytometers are more sensitive and have a higher throughput. But with a microscope, you cannot always tell the difference, especially for adherent cells. Instead, for microscopy, we recommend a different technique, such as detecting caspases with CellEvent Caspase Detection Reagents.

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We have tested Caspase 3/7 Green Detection Reagents (Cat. Nos. C10432, C10433, C10434, C10423, C10723, R37111) for up to 48 hours and observed no toxicity or stability issues with the reagent. If the samples are fixed at the end of the time course the signal will be retained for days. For live cells, apoptotic cells will round up and float away before the loss of fluorescence signal from CellEvent.

The following reference reports a visible signal for up to 72 hrs:

Sambi M, Samuel V, Qorri B, Haq S, Burov SV, Markvicheva E, Harless W, Szewczuk MR. A Triple Combination of Metformin, Acetylsalicylic Acid, and Oseltamivir Phosphate Impacts Tumour Spheroid Viability and Upends Chemoresistance in Triple-Negative Breast Cancer. Drug Des Devel Ther. 2020 May 25;14:1995-2019. doi: 10.2147/DDDT.S242514. PMID: 32546966; PMCID: PMC7260544.

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No, it must be applied to live cell populations.

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Yes, you may use SYTOX AADvanced Dead Cell Stain that is included in the CellEvent Caspase-3/7 Green Ready Flow Reagent (Cat. No. R37167) and in the CellEvent Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit (Cat. No. C10427, C10740). You may also try using other nucleic acid stains in the red or far red channels for staining cells.

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Zitierungen und Referenzen (37)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Combination Small Molecule MEK and PI3K Inhibition Enhances Uveal Melanoma Cell Death in a Mutant GNAQ- and GNA11-Dependent Manner.
Authors:Khalili JS, Yu X, Wang J, Hayes BC, Davies MA, Lizee G, Esmaeli B, Woodman SE,
Journal:Clin Cancer Res
PubMed ID:22733540
Activating Q209L/P mutations in GNAQ or GNA11 (GNAQ/11) are present in approximately 80% of uveal melanomas. Mutant GNAQ/11 are not currently therapeutically targetable. Inhibiting key down-stream effectors of GNAQ/11 represents a rational therapeutic approach for uveal melanomas that harbor these mutations. The mitogen-activated protein/extracellular signal-regulated kinase/mitogen-activated protein kinase (MEK/MAPK) and ... More
Perforin rapidly induces plasma membrane phospholipid flip-flop.
Authors:Metkar SS, Wang B, Catalan E, Anderluh G, Gilbert RJ, Pardo J, Froelich CJ,
Journal:PLoS One
PubMed ID:21931672
'The cytotoxic cell granule secretory pathway is essential for host defense. This pathway is fundamentally a form of intracellular protein delivery where granule proteases (granzymes) from cytotoxic lymphocytes are thought to diffuse through barrel stave pores generated in the plasma membrane of the target cell by the pore forming protein ... More
Membrane sialidase NEU3 is highly expressed in human melanoma cells promoting cell growth with minimal changes in the composition of gangliosides.
Authors:Miyata M, Kambe M, Tajima O, Moriya S, Sawaki H, Hotta H, Kondo Y, Narimatsu H, Miyagi T, Furukawa K, Furukawa K,
Journal:Cancer Sci
PubMed ID:21895867
'NEU3 is a membrane sialidase specific for gangliosides. Its increased expression and implication in some cancers have been reported. Here, we analyzed NEU3 expression in malignant melanoma cell lines and its roles in the cancer phenotypes. Quantitative RT-PCR revealed that high levels of the NEU3 gene were expressed at almost ... More
Pardaxin, an Antimicrobial Peptide, Triggers Caspase-Dependent and ROS-Mediated Apoptosis in HT-1080 Cells.
Authors:Huang TC, Lee JF, Chen JY,
Journal:Mar Drugs
PubMed ID:22073006
Pardaxin is an antimicrobial peptide (AMP) that was first isolated from secretions of the Red Sea Moses sole. The role of pardaxin in inducing apoptosis for preventing cancer has not yet been investigated. In the present study, we examined the antitumor activity of pardaxin against human fibrosarcoma HT-1080 cells; pardaxin ... More
Development of a highly sensitive in vitro endothelial cell toxicity assay for evaluating ricin toxin A chain-based vaccines or therapeutics.
Authors:Machesky NJ, Rusnak JM, Moore EH, Dorsey CB, Ward LA
Journal:Toxicon
PubMed ID:31207351
'The ricin toxin A chain (RTA) is responsible for ricin intoxication due to inhibition of protein synthesis. RTA is also known to cause endothelial toxicity [via a 3 amino acid sequence (x)D(y) motif that acts as a natural disintegrin] resulting in vascular leak syndrome (VLS) in humans. An in vitro ... More
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