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Kit de vectores ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™
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Kit de vectores ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™

El kit de vector ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ contiene el vector de expresión lentiviral regulado por la tetraciclina ViraPower™ HiPerform™Más información
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Número de catálogo A11144
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El kit de vector ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ contiene el vector de expresión lentiviral regulado por la tetraciclina ViraPower™ HiPerform™ adaptado a Gateway™, pLenti6.3⁄TO⁄V5-DEST™ para una clonación fácil basada en recombinación y expresión de alto nivel regulada basada en lentiviral de un gen diana en células de mamíferos que se dividen y no se dividen. El vector pLenti6.3⁄ TO⁄ V5-DEST™ está equipado con dos elementos genéticos clave, lo que lo convierte en un vector HiPerform™: el elemento regulador postranscripcional Woodchuck (WPRE) y la secuencia del tracto central de polipurinas (cPPT) del gen de la integrasa VIH-1 para producir al menos 4 veces más en la expresión de proteínas que los vectores que carecen de estos elementos.

Ventajas
• Genera lentivirus incompetente para la replicación para la transducción de células de mamíferos que se dividen y no se dividen
• Fácil recombinación basada en la tecnología Gateway™
• Expresión estable, a largo plazo, regulada por tetraciclina
• Expresión de proteínas mejorada, hasta 4 veces o más, en comparación con los sistemas tradicionales de expresión lentiviral

Características principales
• WPRE, del virus de la hepatitis woodchuck, permite una mayor expresión transgénica y el cPPT, del gen de la integrasa VIH-1, aumenta el número de copias del lentivirus que se integra en el genoma del huésped, aumentando así el título viral. Juntos, el WPRE y cPPT hacen que la expresión de proteínas en la mayoría de los tipos de células sea cuatro veces mayor en comparación con otros vectores que no contienen estos elementos.
• Promotor híbrido que consiste en el promotor del citomegalovirus (CMV) humano y en dos sitios de operador de tetraciclina 2 (TetO2) para alto nivel, expresión regulada del gen diana
• Marcador de selección de blasticidina para la selección estable bajo control del promotor SV40

El kit incluye
• pLenti6.3⁄TO⁄V5-DEST™ vector
• pLenti3.3⁄TR vector
• pLenti6.3⁄TO⁄V5-GW⁄lacZ plasmídico
• Tetraciclina
• One Shot™ Stbl3™ E. coli químicamente competente (n.º de cat. C737303)
• pENTRTM Gus plasmídico de control positivo.

Solo para uso en investigación. No diseñado para uso diagnóstico o terapéutico.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosAmpicilina (AmpR), blasticidina (BsdR)
HendiduraNo hay sitio de escisión
Sistema constitutivo o inducibleInducible
Tipo de entregaLentivírico
Para utilizar con (aplicación)Expresión viral
Enzima de la pasarelaLR Clonase™ II Plus, LR Clonase™ II
Agente inductorDoxiciclina, tetraciclina
Enzima de PCRPolimerasa de corrección
Tipo de productoKit de vectores
Posición de la etiqueta de la proteína (a su gen)C-terminal
Cantidad20 reacciones
Origen de replicaciónOrigen de pUC
Agente de selección (eucariótico)Blasticidina
Marcador de selección eucariotaBsdR
Promotor del marcador de selecciónPromotor de PGK
Elementos especialesWPRE, cPPT
VectorpLenti
Método de clonaciónGateway
Línea de productosGateway™, HiPerform™, T-REx™, ViraPower™
PromotorCMV/TO
Etiqueta de proteínaEtiqueta de epítopo V5
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Contenido
El kit de vector ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ incluye los siguientes componentes:
• 6 ug de pLenti6.3⁄TO⁄V5-DEST™ vector (40 µL de vector a 150 ng⁄µL en tampón TE, pH 8,0)
• 20 ug de pLenti3.3⁄vector TR (40 µL de vector a 0,5 µg⁄µL en tampón TE, pH 8,0)
• 10 ug de pLenti6.3⁄TO⁄V5-GW⁄lacZ plasmídico (20 µL de plasmídico a 0,5 µg⁄µL en tampón TE, pH 8,0)
• 1 ml de tetraciclina (10 mg⁄ml en agua)
• One Shot™ Stbl3™ E. coli químicamente competente (n.º de cat. C737303): 21 x 50 µl de células Stbl3™, 6 ml de SOC 50 y medio µL de ADN de control de pUC19 (10 pg⁄µL).
• pENTR™ Gus plasmídico de control positivo.

Almacenamiento
• Vectores: -20° ºC
• tetraciclina: -20° ºC (protegido de la luz)
• One Shot™ Stbl3™ E. coli químicamente competente: -80° ºC
• pENTR™ control positivo GUS: -20 °C
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Nombre del vector
Mapas de vectores
Poliligador
Secuencia
Restricción
pET104.1-DEST
pSinRep5
pTrcHis2
pSinHis

Preguntas frecuentes

In the single-step protocol for the BP/LR Clonase reaction, we would not recommend substituting the BP Clonase II/LR Clonase II enzymes with BP Clonase /LR Clonase enzymes as this would result in very low recombination efficiency.

Yes, we have come up with a single-step protocol for BP/LR Clonase reaction (http://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/gateway-cloning.html#1), where DNA fragments can be cloned into Destination vectors in a single step reaction, allowing you to save time and money.

We would recommend performing a BP reaction with a Donor vector in order to obtain an entry clone. This entry clone can then be used in an LR reaction with the Destination vector to obtain the new expression clone.

We do not offer the 5X LR Clonase buffer and 5X BP Clonase buffer as standalone products. They are available as part of the enzyme kits.

We do not offer any Gateway vectors for expression in plants.

Citations & References (2)

Citations & References
Abstract
Endothelial cell surface F1-F0 ATP synthase is active in ATP synthesis and is inhibited by angiostatin.
Authors:Moser TL, Kenan DJ, Ashley TA, Roy JA, Goodman MD, Misra UK, Cheek DJ, Pizzo SV
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:11381144
'Angiostatin blocks tumor angiogenesis in vivo, almost certainly through its demonstrated ability to block endothelial cell migration and proliferation. Although the mechanism of angiostatin action remains unknown, identification of F(1)-F(O) ATP synthase as the major angiostatin-binding site on the endothelial cell surface suggests that ATP metabolism may play a role ... More
Characterization of peroxisomal Pex5p from rat liver. Pex5p in the Pex5p-Pex14p membrane complex is a transmembrane protein.
Authors:Gouveia AM, Reguenga C, Oliveira ME, Sa-Miranda C, Azevedo JE
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:10889202
Pex5p is the receptor for the vast majority of peroxisomal matrix proteins. Here, we show that about 15% of rat liver Pex5p is found in the peroxisomal fraction representing 0.06% of total peroxisomal protein. This population of Pex5p displays all the characteristics of an intrinsic membrane protein. Protease protection assays ... More
2 total citations

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