Kit de ensayo de síntesis de proteínas Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 488

El kit de ensayo de síntesis de proteínas Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 488 proporciona un método rápido, sensible y no radiactivo para la detección de síntesis de proteínas mediante microscopía de fluorescencia u obtención de imágenes de alto contenido. En este ensayo, la puromicina o-propargil (OPP) se incorpora de forma eficaz a las proteínas recién traducidas en medios completos que contienen metionina y se etiqueta con fluorescencia con un tinte Alexa Fluor™ brillante y fotoestable en una reacción de clic rápida, altamente específica y leve.

Las características del kit incluyen:

• No requiere ningún cambio de medios: funciona en medios completos que contienen metionina, no es necesario eliminar medios celulares
• Compatible con multiplex: la tecnología Click-iT™ Plus retiene la señal de GFP y la unión de faloidinas conjugadas con fluorescencia
• No radiactivo: una alternativa a los métodos tradicionales de ³⁵S-metionina
• Funciona in vivo: los resultados publicados demuestran la utilidad in vivo para la determinación de la traducción de proteínas

El kit contiene o-propargil-puromicina (OPP), un alquino análogo de puromicina (también disponible por separado), así como azida picolil Alexa Fluor™ 488 y todos los reactivos necesarios para realizar la reacción clic. La OPP se usar para alimentar a células cultivadas y se incorpora a proteínas durante la síntesis de proteínas activas. Al añadir azida picolil Alexa Fluor™ 488 y los reactivos de reacción clic se genera un vínculo quimioselectivo, o reacción «clic», entre el colorante azida picolil y el alquino OPP, lo que permite que las proteínas modificadas se detecten mediante el análisis basado en imágenes.

La reacción clic utiliza porciones biortogonales (biológicamente únicas) para etiquetar de manera fluorescente las células proliferantes, lo que ayuda a que los niveles de fondo sean bajos y la sensibilidad de detección muy alta. Debido a las condiciones de reacción leves, los ensayos Click-iT™ Plus detectan los eventos de traducción de proteínas al tiempo que permiten la preservación de la morfología celular, la unión de la flaloidina etiquetada con fluorescencia y la señal fluorescente de GFP.

A diferencia de la ³⁵S-metionina, utilizada en métodos tradicionales, la OPP no es un aminoácido análogo, por lo que puede añadirse directamente a las células en medios completos o utilizarse para determinar la síntesis de proteínas in vivo.

El kit contiene todos los componentes necesarios para etiquetar y detectar la OPP incorporada en proteínas recién traducidas en muestras de células adherentes. El kit incluye reactivos suficientes para etiquetar 25 cubreobjetos 18 mm × 18 mm usando 1 ml de tampón de reacción por prueba.