La préparation des échantillons est l’une des étapes les plus variables et les plus fastidieuses de l’analyse des protéines par spectrométrie de masse, et la qualité et la reproductibilité de l’extraction et de la préparation des échantillons ont un impact significatif sur les résultats. De temps en temps, des étapes supplémentaires sont nécessaires pour améliorer la qualité de l’échantillon, notamment la digestion et la récupération des fragments de peptides à partir de gels SDS-PAGE ou la guanidination des peptides pour améliorer la couverture des séquences. Chaque kit a été optimisé pour produire des digestions de peptides de haute qualité pour une analyse protéomique fiable à l’aide de la spectrométrie de masse.

Kit de digestion tryptique et de guanidination en solution Pierce
Le kit de digestion tryptique et de guanidination en solution Pierce offre une procédure et des réactifs optimisés pour environ 90 digestions contenant chacun 0,025 à 10 µg de protéines.

• Digestion complète—la trypsine digère complètement les protéines de 0,025 à 10 µg (∼90 réactions)
• Spécifique—la réaction de guanidination ne produit qu’une faible voire aucune modification d’extrémité N-terminale
• Pratique—le kit comprend des réactifs pour la digestion, la réduction, l’alkylation et la guanidination
• Efficace—la protéine peut être digérée et guanidinée en une seule journée

La trypsine clive spécifiquement les liaisons peptidiques côté carboxyle des résidus d’arginine et de lysine. Les signaux des peptides contenant de l’arginine sont généralement plus forts, car la chaîne latérale est plus basique. Pour améliorer l’ionisation globale, la guanidination transforme les lysines en homoarginines et est spécifique à l’amine de la lysine, mais peut se produire de façon minime au niveau de l’amine de l’extrémité N-terminale du peptide. Cette dérivatisation entraîne une augmentation de l’intensité des peptides contenant de la lysine et une meilleure couverture des séquences dans l’ensemble.

Kit de digestion tryptique en gel Pierce
Le kit de digestion tryptique en gel offre un ensemble complet de réactifs pour effectuer approximativement 150 digestions sur des bandes de protéines colorées par des colorants colloïdaux ou des coomassie fluorescentes. Le kit comprend de la trypsine porcine modifiée, des tampons de décoloration, des réactifs de réduction, des réactifs d’alkylation et des tampons de digestion ainsi que des instructions détaillées et simples.

• Complet—comprend tous les réactifs nécessaires pour la décoloration en gel, la réduction, l’alkylation et la digestion tryptique des protéines
• Robuste—la procédure optimisée et les réactifs produisent des digestions et une génération de données fiables en utilisant un large éventail de conditions
• Spécifique—contient de la trypsine hautement purifiée et modifiée de qualité MS sans activité chymotryptique et avec une activité autolytique minimale

Deux étapes clés de la préparation d’échantillons sont la digestion complète des protéines en peptides et la concentration et le nettoyage ultérieurs des peptides pour l’analyse par spectrométrie de masse. Le kit de digestion tryptique en gel Pierce réalise la première de ces étapes pour les échantillons de protéines extraits de bandes de gel. Les colonnes et pointes de centrifugation Pierce C-18 accomplissent la deuxième étape pour nettoyer l’échantillon afin qu’il soit prêt pour la spectrométrie de masse.