Thermo Scientific EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin은 수용성 NHS-에스테르 비오틴화(biotinylation) 시약으로, 이 시약의 spacer arm에는 단백질과 세포 표면 일차 아민을 가역적 방식으료 표지할 수 있는 분리 가능 이황화물 결합이 포함되어 있습니다.

EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin의 특징:

• 단백질 표지 – 고정, 정제, 검출이 용이하도록 항체를 비오틴화함
• 세포 표면 표지 – 음으로 하전된 시약은 세포 막(membrane)을 투과하지 못하기 때문에 전체 세포의 표면 단백질만을 비오틴화함
• 아민 반응성—lysine 측 사슬 또는 polypeptide의 아미노 말단과 같은 일차 아민(-NH2)과 반응
• 분리성—spacer arm의 이황화결합 덕분에 DTT와 같은 환원제를 사용해 비오틴 표지를 제거할 수 있음. 즉, 미량의 sulfhydryl 기(group)가 분자에 계속 결합되어 있음
• 용해성 – 하전된 sulfo-NHS 기는 일반 NHS-에스테르 화합물에 비해 시약 수용성을 높여 줌
• 중간 길이—spacer arm(타겟에 추가된 총 길이)은 24.3angstrom으로, 7-원자 사슬(7-atom chain)로 확장된 천연 비오틴 발레르산(valeric acid)기로 이뤄져 있음

Sulfo-NHS-SS-Biotin은 thiol을 분리할 수 있는 아민 반응성 비오틴화 시약으로, 확장된 spacer arm을 함유하여 avidin 결합과 관련된 입체 방해(steric hindrance)를 줄여 줍니다. 이 시약은 수용성이므로, 용매에 대한 내성이 없거나 용매 함유로 인해 복잡해진 어플리케이션에서 DMSO 또는 DMF와 같은 유기용매가 없을 때 비오틴화가 가능합니다. (a) 이 화합물의 sulfonate 기(group)는 이 화합물이 세포막을 투과하지 못하도록 하고 (b) 이 화합물의 분리 가능한 spacer arm은 처음 비오틴화된 단백질을 streptavidin 친화 칼럼에서 방출할 수 있기 때문에 이 화합물은 특히 세포 표면 단백질을 표지하고 정제하는 데 사용됩니다.

당사는 특정 용도의 연구 어플리케이션에서 최상의 전제품 무결성, 일관성, 성능을 보장하는 비오틴 시약을 제조합니다.

비오틴의 N-Hydroxysulfosuccinimide (NHS) esters는 비오틴화(biotinylation) 시약 중에서도 가장 인기 있는 유형입니다. NHS-활성화 비오틴은 알카리성 버퍼에서 일차 아미노기(-NH2)와 효율적으로 반응하여 안정적인 amide 결합을 형성합니다. 단백질(항체 등)은 보통 lysine (K) 잔기의 side chain과 각 polypeptide의 N-말단을 포함한 표지를 위한 표적으로 사용 가능한 일차 아민을 갖습니다.

다양한 비오틴 여러 NHS-에스테르 시약은 각기 길이, 용해성, 세포 투과성, 절단성이 다릅니다. Non-sulfonated NHS-비오틴은 세포를 투과할 수 있지만, DMSO 또는 DMF와 같은 유기 용매에서 용해되어야 합니다. Sulfo-NHS 비오틴(그리고 pegylated spacer가 있는 비오틴)은 직접 물에 용해되지만, 막(membrane)을 투과할 수 없습니다. 이황화결합을 포함하는 여러 품종(Variety)은 환원제를 사용해 절단할 수 있어 비오틴기를 표지된 단백질에서 분리할 수 있습니다.

관련 자료:
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비오틴화 방법과 어플리케이션 검토
교차 결합(및 표지 시약)의 화학

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NHS-PEG4-Biotin and Kits—29.0 angstrom spacer arm, pegylated
Sulfo-NHS-LC-Biotin and Kits—22.4 angstrom spacer arm, non-cleavable
비오틴화 시약 전체
Avidin, Streptavidin, NeutrAvidin Affinity Resin