La transcriptasa inversa (RT) Thermo Scientific Maxima H Minus se obtuvo a través de la evolución in vitro de la transcriptasa inversa M-MuLV. La enzima posee una actividad polimerasa dependiente de ARN y dependiente de ADN, pero carece de actividad ARNasa H debido a la mutación en el dominio ARNasa H de la transcriptasa inversa M-MuLV. La enzima modificada mediante ingeniería genética ofrece una termoestabilidad considerablemente mejorada, capacidad de procesamiento 50X veces superior, resistencia y una mejor tasa de síntesis en comparación con la transcriptasa inversa M-MuLV natural.

La actividad de la ARNasa H eliminada permite que la enzima produzca transcripciones de ARN muy largas de hasta 20 kb. Debido a su elevada termoestabilidad, la enzima mantiene su completa actividad durante la reacción de transcripción inversa completa y genera los mejores niveles de rendimiento del ADNc. La temperatura de reacción se puede aumentar hasta los 65 °C para una transcripción eficiente de las regiones de ARN con una elevada estructura secundaria o para mejorar la especificidad mediante primer específicos del gen. La procesividad extremadamente alta de la enzima Maxima H Minus resulta en una mayor resistencia a los inhibidores de reacción comunes, como guanidina, formamida y etanol.

Aspectos destacados

• termoestable: 90% activo después de la incubación a 50 °C durante 60 minutos en una mezcla de reacción.
• Activa hasta a 65 °C
• Alta producción de ADNc de longitud completa (hasta 20 kb)
• Alta sensibilidad: síntesis reproducible del ADNc a partir de una amplia variedad de cantidades de entrada de ARN total (de 1 pg a 5 µg)
• Eficiente: síntesis del ADNc completa en un periodo de entre 15 y 30 minutos
• Aumento de la resistencia a los inhibidores comunes de la reacción
• Incorpora nucleótidos modificados

Aplicaciones

• Síntesis de ADN complementario de primera cadena para RT-PCR y RT- PCR en tiempo real.
• Transcripción inversa a temperaturas elevadas para reducir los efectos de la estructura secundaria.
• Síntesis de ADNc para clonación y expresión.
• Generación de sondas de ADNc etiquetadas para microarrays.
• Análisis de ARN por extensión de primers.

Nota
• También disponible: : Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus.