La fosfatasa alcalina Invitrogen™ Anza™ está diseñada para su uso en la extracción de grupos de fosfato de 3' y 5' que permanecen tras la digestión enzimática de restricción Anza™, como por ejemplo para la desfosforolización de vectores antes de la ligadura de la inserción y la extracción de fosfatos 5′ antes del marcado final. Dado que el grupo de fosfatos 5′ es necesario para la ligadura de ADN, el tratamiento de vectores con fosfatasa alcalina Anza evita la ligadura automática y la recircularización, lo que resulta en una disminución del fondo vectorial durante la clonación.

Características de la fosfatasa alcalina Anza:

• Validada para su uso con todas las enzimas de restricción Anza
• Desfosforila en 15 minutos a 37 °C
• Inactivación por calor en 5 minutos a 80 °C
• Completamente activa en el tampón Anza
• Desfosforila todos los tipos de extremos de ADN (romos 5'- y 3'-salientes)

Protocolo flexible
Algunas enzimas de restricción prohíben o reducen el proceso de desfosforilación cuando la digestión y la desfosforilación se realizan simultáneamente. Por lo tanto, la fosfatasa alcalina Anza puede usarse de tres maneras, dependiendo de la enzima de restricción utilizada:

• One-Step Protocol: Digestión de enzimas de restricción y desfosforilación en tampón Anza simultáneas
• Procolo de inactivación por calor en dos pasos: La digestión se lleva a cabo primero, seguida de la inactivación por calor (20 minutos a 80 °C), y luego la desfosforilación
• Protocolo de purificación de la columna en dos pasos: La digestión se lleva a cabo primero, seguida de la purificación de la columna, y luego la desfosforilación

No es necesario extraer las enzimas
La fosfatasa alcalina Anza se inactiva por completo después de 5 minutos a 80 °C, por lo que no es necesario extraer la enzima a través de la extracción de fenol/cloroformo o la purificación de la columna antes de los siguientes pasos de ligadura. Si se utilizó el protocolo de un paso, caliente la mezcla de reacción durante 20 minutos a 80 °C para inactivar la enzima de restricción así como la fosfatasa alcalina. La inactivación por calor de la fosfatasa alcalina evita que la fosfatasa residual desfosforile los fragmentos de ADN añadidos a la mezcla de reacción para la ligadura.

La fosfatasa alcalina Anza™ forma parte del sistema de clonación de enzimas de restricción Anza™, con lo cual se unifican los procesos de clonación tradicionales. Otras enzimas modificadoras de ADN de Anza incluyen la mezcla maestra de ligasa de ADN T4 Anza, el kit de polinucleótido cinasa T4 (PNK T4) Anza, el kit de extremos romos de ADN Anzay el kit de reparación final de ADN Anza.

Para más información sobre el sistema Anza, visite www.thermofisher.com/anza.