Medio de montaje antidecoloración ProLong™

El medio de montaje antidecoloración ProLong Glass es un medio de montaje a base de glicerol, resistente y listo para su uso que se puede aplicar directamente a células marcadas con fluorescencia o muestras de tejido en portaobjetos de microscopio o cubreobjetos. Está formulado sin tinción de ADN, con la tinción de ADN azul NucBlue (Hoechst 33342) o con la tinción de ADN rojo oscuro SYTOX Deep Red. El medio de montaje ProLong Glass tiene un índice de refracción de 1,52 después del curado, similar al de los cubreobjetos de vidrio, aceite de inmersión compatible y óptica de microscopio de inmersión en aceite, lo que permite una resolución y sensibilidad superiores. El medio de montaje ProLong Glass también está diseñado para proporcionar una protección incomparable contra la decoloración fotográfica en los espectros visible y de infrarrojo cercano. Puede utilizar el medio de montaje de antidecoloración ProLong Glass con casi cualquier tinte o proteína fluorescente (por ejemplo, GFP, RFP, mCherry) y con cualquier tipo de célula o tejido para profundidades de imagen que oscilan entre 0 y 100 µm para imágenes brillantes, de pilas Z de alta resolución, 3D y 2D. Para un medio de montaje sin curado con un índice de refracción de 1,52, pruebe el medio de montaje antidecoloración del conjunto SlowFade Glass Soft.

Con su alto índice de refracción de 1,52 y su fórmula antidecoloración de alta calidad, el medio de montaje antidecoloración ProLong Glass ofrece las siguientes ventajas:
• Hasta un 75 % de mejora en la resolución axial para obtener imágenes nítidas
• 3–4 veces más profundidad focal de exposición en comparación con los medios de montaje con índice de refracción de 1,47, con imágenes nítidas para monocapas de células, cortes de tejido o cultivos celulares 3D de hasta 150 μm de grosor/profundidad focal
• Bajo fondo en todo el espectro
• Señales conservadas de la decoloración inhibida
• De semanas a meses de estabilidad para muestras montadas en portaobjetos
• Facilidad de uso
• Disponibilidad con o sin DAPI

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El medio de montaje antidecoloración de fijación dura ProLong Glass ya viene mezclado y listo para usarlo en un frasco cuentagotas o un frasco de 10 ml con o sin tinción de ADN. NucBlue (Hoechst 33342) se excita mediante iluminación UV a 360 nm cuando se une a ADN, con una emisión máxima a 460 nm y se detecta utilizando un filtro tradicional DAPI. La tinción SYTOX Deep Red se excita mediante iluminación roja a 660 nm cuando se une a ADN, con una emisión máxima a 682 nm y se detecta utilizando un filtro tradicional Cy5/rojo oscuro. Después de eliminar el exceso de agua, simplemente vierta una gota del medio de montaje en la muestra, añada un cubreobjetos, aplique curado y obtenga la imagen. El medio de montaje ProLong Glass es un medio de montaje de curado resistente que minimiza la refracción óptica y la aberración esférica en la trayectoria óptica y que permite el almacenamiento a largo plazo de las muestras y ayuda a proteger las muestras de la fotodecoloración. El medio de montaje ProLong Glass no se decolora o encoge cuando se aplica curado, lo que permite tomar imágenes fluorescentes de alta calidad semanas o incluso meses después de montar los portaobjetos.

El medio de montaje ProLong Glass con tinción NucBlue contiene una concentración optimizada de tinción Hoechst 33342, que proporciona etiquetado nuclear superior de la mayoría de células y tejidos. Medio de montaje ProLong Glass con tinción NucBlue no se recomienda para muestras de más de 30 µm de grosor. Las muestras más gruesas pueden requerir incubaciones más prolongadas con reactivos de marcado, por lo que se recomienda una preincubación con el reactivo NucBlue Live ReadyProbes.

Imágenes más brillantes y nítidas
Los estudios muestran que la resolución axial de un sistema de microscopia puede mejorarse igualando el índice de refracción del medio de montaje, lo que maximiza la captación de luz de la lente de objetivo (1–3). Fouquet et. al. observaron una mejora espectacular en la resolución axial al utilizar un microscopio confocal con medios de alto índice de refracción (3). Cuando se compara el medio de montaje antidecoloración ProLong Glass, que tiene un índice de refracción de 1,52, con un medio de montaje con un índice de refracción de 1,47, la resolución axial se mejora en un 32 % a una profundidad focal de 40 µm y en un 75 % a una profundidad focal de 100 µm (consulte la figura siguiente). La intensidad de la señal y la sensibilidad de los fluoróforos también mejoran a medida que aumenta la profundidad focal dentro de la muestra. En la dirección lateral se observa una mejora de la resolución y la sensibilidad igual o mayor. Esto convierte a Prolong Glass en un montaje de alta calidad para la adquisición de imágenes de pilas Z, 3D y 2D de células y tejidos a profundidades de 0 a 100 µm (consulte la figura siguiente).

Inhiba la decoloración fotográfica en los espectros visibles y casi IR
Independientemente de los colorantes o proteínas fluorescentes que se utilicen, el medio de montaje antidecoloración ProLong Glass ayuda a proporcionar una protección superior contra la fotodecoloración. Se ha demostrado que cuenta con el mejor rendimiento de su clase con una amplia gama de tintes fluorescentes, incluidos los colorantes Alexa Fluor, FITC, TRTC, Texas Red, Cy3 y Cy5 (consulte la figura siguiente). El montaje ProLong Glass no suprime los fluoróforos y su capacidad para proporcionar una señal más brillante, sin ningún fondo, le ayuda a garantizar que obtendrá las imágenes de la mejor calidad y resolución para su publicación.

Señales estables durante la obtención de imágenes y para el almacenamiento a largo plazo
El montaje antidecoloración ProLong Glass es la opción idónea para almacenar las muestras con colorantes o proteínas fluorescentes y para conservar la intensidad de la señal durante sesiones prolongadas de obtención de imágenes, como el escaneo repetido bajo iluminación de escaneo láser confocal, o con microscopía de resolución extremadamente alta. Fácil de usar: solo hay que retirar el exceso de agua de la muestra teñida y montar.

Obtenga una excelente correspondencia de índice de refracción para conseguir imágenes nítidas
Para las aplicaciones modernas de obtención de imágenes de alta resolución, la equivalencia del índice de refracción es esencial. El medio de montaje antidecoloración ProLong Glass curará con un índice de refracción de 1,52. Además, esta propiedad de curado implica que no necesita usar complejas resinas acrílicas (por ejemplo, esmalte de uñas), que pueden dañar o arruinar objetivos de microscopios modernos.

Referencias
1: Cremer C, Masters BR. Resolution enhancement techniques in microscopy. Eur Phys J. 2013 38(3):281-344.
2: Shimi T, Kittisopikul M, Tran J, Goldman AE, Adam SA, Zheng Y, Jaqaman K, Goldman RD. Structural organization of nuclear lamins A, C, B1, and B2 revealed by superresolution microscopy. Mol Biol Cell. 2015 26(22):4075-86.
3: Fouquet C, Gilles JF, Heck N, Dos Santos M, Schwartzmann R, Cannaya V, Morel MP, Davidson RS, Trembleau A, Bolte S. Improving axial resolution in confocal microscopy with new high refractive index mounting media. PLoS One. 2015 10(3):e0121096.