EZ-Link™ Desthiobiotinylation and Pull-Down Kit

Thermo Scientific EZ-Linkデスチオビオチン化およびプルダウンキットは、精製したタンパク質にビオチンラベルを行い、ストレプトアビジンアガロース樹脂を用いてマイルドな溶出条件で相互作用複合体を精製するための試薬一式です。

EZ-Linkデスチオビオチン化およびプルダウンキットの特長：

•スルホ-NHS-LC-デスチオビオチン – ストレプトアビジンと特異的に結合しますが、軽度の条件でも容易に溶出するビオチン様のラベルタンパク質
• プルダウンアッセイ – タンパク質をラベリングし、無傷で機能的なタンパク質相互作用複合体を回収（精製）するためのシンプルで最適化されたプロトコルと試薬
• キット一式 – ベイトタンパク質を調製するためのラベリング試薬と脱塩カラム、プルダウンを行うためのストレプトアビジンアガロースと溶出バッファーを含みます

このオールインワンのラベリングおよび精製キットは、アミン反応性NHSエステル試薬であるスルホ-NHS-LC-デスチオビオチンを使用して、タンパク質相互作用の捕捉と精製のためのベイトとして使用するために、精製または混合されたタンパク質サンプルに効果的にタグを付けます。ラベリングされたタンパク質のデスチオビオチンタグは、ストレプトアビジンに高い特異性で結合していますが、非常に緩やかな条件（通常の遊離ビオチンとの競合的な置換により）で容易に溶出します。このシステムは、ストレプトアビジンアガロースビーズを用いて、細胞溶解液から特定のタンパク質相互作用複合体を効果的かつ穏やかに捕捉し、単離（プルダウン）することを可能にします。このキット一式には、すぐに使える1 mgバイアルのデスチオビオチン化試薬、ラベル付きタンパク質を処理するための脱塩カラム、バッファー付きの高容量ストレプトアビジンアガロースが含まれており、複数のマイクロ遠心スケールのプルダウンアッセイ実験を簡単に行うことができます。既知のタンパク質（ベイト）と以前に発見されていないターゲット（プレイ）との間の新しい相互作用を同定したり、既知のベイトタンパク質とプレイタンパク質間の相互作用を確認します。

デスチオビオチンは、ストレプトアビジンにほぼ同等の特異性で結合しますが、ビオチンよりも親和性が低い（1/Kd = 10¹¹対10¹⁵ M）ビオチンの単環、硫黄を含まないアナログです。その結果、デスチオビオチン化ベイトタンパク質とその相互作用パートナーは、遊離ビオチンとの競合的な置換に基づいて、穏やかな条件でストレプトアビジンアフィニティー樹脂から簡単かつ特異的に溶出できます。また、生体サンプルを用いたプルダウンアッセイ実験では、デスチオビオチンのこうした穏やかな遊離特性により、遊離ビオチンを用いて標的タンパク質複合体を溶出した際に、ストレプトアビジンへの結合を維持した状態で、内因性ビオチン化分子の共精製を最小限に抑えることができます。また、修飾済みアビジン-ビオチンアフィニティーシステムにより、複合体の結合を解除したり、標的タンパク質や細胞を損傷したりする可能性のある厳しい溶出条件を用いる必要がなくなります。デスチオビオチンをベースとした技術は、融合タグで発現していないネイティブまたは組換えタンパク質を使用する場合や、インタクトな細胞や細胞表面タンパク質を標的とするなど、ネイティブな条件下で捕捉されたタンパク質を単離する場合に最適です。

スルホ-NHS-LC-デスチオビオチンは、長鎖（LC）スペーサーアームを持つスルホ-NHSエステルとして活性化され、タンパク質やその他の分子の一級アミン（-NH2）をデスチオビオチン基で共有結合的に標識するビオチンの一種です。No-Weighフォーマット（1 mg 再密封可能バイアル）は、少量の試薬を計量することに伴う困難さを解消し、未使用の試薬を加水分解から最大限に保護します。

関連製品
Pierce™ビオチン化タンパク質相互作用プルダウンキット