Thermo Scientific Pierce磁気RNAタンパク質プルダウンキットは、エンドラベル化されたRNAをベイトとして使用して、タンパク質とRNAの相互作用を濃縮するための合理化された堅牢な方法を提供します。

磁気RNAタンパク質プルダウンキットの特長：

•直接 – リボ核タンパク質複合体をエンドラベル化したRNAで直接補足し、プルダウンのための抗体を使用しない、または必要としません
• 使いやすい – RBPの濃縮にスピンカップや遠心分離は不要、RNAラベリング反応後のハンズオン時間を最小限（3時間未満）に抑えた合理化された手順
• 柔軟 – さまざまな長さと複雑さのラベリングのために、in vitro転写RNAまたは合成RNAを使用し、内因性、過剰発現、およびin vitro翻訳された解物を使用してタンパク質を濃縮しました
• 特異的 – 低ビーズバックグラウンドで、無関連RNAまたは変異RNAは特定のRBPを有意に濃縮しません
• 経済的 – 市販の合成末端標識化RNA、磁気ビーズおよび試薬を別途購入するより費用がかかりません
• 一式 – アッセイに必要なバッファーを含むラベリングモジュールと濃縮モジュールの両方が含まれており、陽性対照RNA、陰性対照RNA、およびRBP抗体が含まれています

磁気RNAタンパク質プルダウンキットは、デスチオビオチンとストレプトアビジン磁気ビーズで末端標識したRNAを用いて、効率的にRNA結合タンパク質（RBP）を濃縮するための試薬を提供します。このキット一式には、RNA標識反応20回分とタンパク質-RNAプルダウンアッセイ20回分に十分な試薬が含まれています。タンパク質-RNA相互作用の直接濃縮は、核酸に組み込まれたタンパク質-RNA複合体または構成成分の抗体を捕捉する代替手段になります。このキットに追加されたメリットは、標識およびプルダウンアッセイ用の検証済みコントロールが付属していることです。このキットは、ウェスタンブロッティングや質量分析（MS）を含むいくつかの下流のアプリケーションに適応しています。

内容：
このキット一式には、Pierce RNA 3'-End Desthiobiotinylation Kit、陽性対照および陰性対照RNA、核酸互換性のあるストレプトアビジン磁気ビーズ、RBP濃縮および溶出用のバッファーが含まれています

必要なもの：
ユーザー提供のRNAと溶解物（実験試料）

アプリケーション：
• 変異解析
• 構造機能解析
• RNAの同定：タンパク質相互作用
• 未知のRNAのMS解析：タンパク質結合対または複合体

RNA 結合タンパク質を濃縮するためのベイトとして標識化 RNA を利用すると、相互作用を直接捕捉するという点で抗体による濃縮よりメリットがあります。このキットに含まれているのは、Pierce RNA 3'-End Desthiobiotinylationキットで、これは、一本鎖RNAの3'末端に単一のシチジン二リン酸ヌクレオチドを添付するためにT4 RNAリガーゼを使用します。デスチオビオチンは、検出や溶出可能なアフィニティーハンドルとして使用できます。ヌクレオチドとデスチオビオチン間のスペーサーの長さは、RNAからタンパク質へのアクセシビリティを損なうことなく、ビーズに効率的に付加するよう最適化されています。

RNA結合タンパク質の濃縮のための手順は、使いやすさのために最適化されています。標識化RNAはまずビーズに捕捉され、タンパク質を結合するためにRNAに適応させられます。RNAに結合されたビーズは、タンパク質ライセートが追加される前に、タンパク質RNA結合バッファーで平衡化されます。洗浄後、非変性ビオチン溶出バッファーまたはSDS-PAGEローディングバッファーを使用して、サンプルを溶出できます。溶出サンプルは、ウェスタンブロッティングや質量分析など、さまざまなダウンストリームアプリケーションに対応します。

プルダウンアッセイ用のコントロールシステムは、3'-非翻訳領域アンドロゲン受容体（AR）RNA、poly(A)25 RNA、および哺乳類細胞溶解物を利用します。アンドロゲン受容体RNAの近位3'-非翻訳領域（UTR）は、HuRおよびポリ（C）結合タンパク質（CP1および2）のためのUCに富んだ領域を含んでいます。これらのRNA結合タンパク質によって、mRNAの安定性（HuR）とmRNAのターンオーバーおよび翻訳が調整されます（CP1および2）。ネガティブコントロールRNAであるpoly(A)25 RNAには、HuRまたはpoly(C) BP結合部位は含まれていません。

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