DTNB (Ellman's Reagent) (5,5-dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid)

Thermo Scientific PierceのEllmanの試薬（DTNB）は、スルフヒドリル基と反応して着色された製品を生成し、溶液中の還元システインやその他の遊離スルフヒドリルを測定する信頼性の高い方法を提供します。

Ellmanの試薬（5,5'-dithio-bis-[2-nitrobenzoic acid]）は、システインなどのスルフヒドリル基を含む化合物の標準曲線と比較することで、サンプル中のスルフヒドリル基を推定するために使用されます。または、スルフヒドリル基は、TNBの消散係数（412 nmで14,150M-1 cm-1）を使用して測定できます。Ellmanの試薬は、プレカラム誘導体化手順を用いたHPLCによるアルキルチオールの測定や、複数の酵素の活性部位におけるチオールの研究など、スルフヒドリル基推定以外のアプリケーションに使用されています。

Ellmanの試薬の特長：

•スルフヒドリル基アッセイ—遊離（還元）スルフヒドリル基（—SH）と定量的に反応して検出可能なTNB製品を生成します
• 比色検出—着色製品により、キュベットまたはマイクロプレートでの分光光度測定が可能です（λ最大=412 nm、ε=14,150/M·cm）
• 実績のある方法—特性評価された化学的性質により、消散係数の計算またはシステイン標準液の比較によって、ペプチドまたはタンパク質スルフヒドリル基を定量できます

試薬の特性
•代替名：DTNB、Ellmanの試薬
•化学名：5,5'-dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid)
•反応性：スルフヒドリル基（—SH）
•化学式：C₁₄H₈N₂O₈S₂
• CAS番号：69-78-3
• 分子量：396.35
• 形状：黄色の結晶粉末

DTNBは遊離スルフヒドリル基と反応して、ジスルフィドと2-nitro-5-thiobenzoic acid (TNB)を混合して生成します。この反応におけるDTNBの標的は、遊離スルフヒドリル基の接合ベース（R—S-）です。したがって、この反応の速度はいくつかの要因に依存します。（1）反応pH、（2）スルフヒドリル基のpKa'、（3）立体的および静電的影響。TNBは、この反応で生成される着色種で、可視範囲でモル吸光係数が高くなっています。TNBのモル吸光係数は当初、Ellman（1959）により412 nmおよびpH 8.0で13,600M-1 cm-1と報告されていました。そのため、この値は文献で頻繁に引用されています。しかし、その後の研究では、モル吸光係数が412 nmで14,150M-1 cm-1 at 412 nmの値によってより正確に反映されることが示されています。TNBの消失は、7.6～8.6のpH変化による影響を受けません。ただし、TNBの消散は他の溶媒とは異なります。