BCA Protein Assay Reagent AはPierce BCA Protein Assay Kitのコンポーネントです。このキットは、タンパク質標準物質と比較して総タンパク質濃度を測定するのに使用する、2コンポーネントの高精度界面活性剤適合アッセイです。Pierce BCA試薬は、タンパク質研究で扱うほとんどのサンプルタイプでタンパク質濃度を正確に測定します。Pierce BCAアッセイを使用して、全細胞ライセートの収量、アフィニティーカラム分画、および精製タンパク質を測定したり、産業アプリケーションにおけるタンパク質汚染をモニターできます。BCAアッセイはほとんどの色素結合法と比較して、タンパク質組成の違いによる影響をはるかに受けにくく、タンパク質が異なっても優れた均一性を実現します。
すべてのBCAタンパク質アッセイの比較›Pierce BCA Protein Assay Kit(Reagents AおよびB)の特長:
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比色分析—目視による推定、または標準的な分光光度計やプレートリーダー(562nm)による測定
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均一性—色素結合法(Bradford)よりもタンパク質間のばらつきが少ない
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適合性—一般的な濃度のほとんどのイオン性および非イオン性界面活性剤に影響されない
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アッセイ時間—インキュベーションは30分;従来のLowry法よりも容易で4倍高速
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アッセイ範囲—BSAの直線測定範囲は200~2,000 µg/mL
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感度—増強プロトコルにより5 µg/mLまで検出
アッセイの作用機序BCA Protein Assayは、アルカリ媒体中でのタンパク質によるCu
2+からCu
1+へのよく知られた還元反応と、ビシンコンニン酸(BCA)による第一銅陽イオン(Cu
1+)の高感度で選択的な比色検出を組合わせています。最初のステップでは、アルカリ性環境で銅とタンパク質がキレートして淡青色の錯体を形成します。ビューレット反応として知られるこの反応では、酒石酸カリウムナトリウムを含有するアルカリ環境で、3つ以上のアミノ酸残基を含有するペプチドが第二銅イオンと有色キレート錯体を形成します。
発色反応の2番目のステップでは、ステップ1で形成された還元(第一銅)陽イオンとBCAが反応します。BCAの2つの分子と1つの銅イオンがキレートすることで、濃い紫色の反応生成物が生成されます。BCA/銅錯体は水溶性で、タンパク質濃度の増加に比例して562 nmで強い線形吸光性を示します。この錯体は、最初の反応で生成される淡青色の錯体よりも約100倍高感度(すなわち検出限界が低い)です。
この反応は、タンパク質のアミノ酸配列にある4つのアミノ酸残基(システイン、シスチン、チロシン、トリプトファン)による影響を強く受けます。ただし、Coomassie色素結合法とは異なり、普遍的なペプチドバックボーンは色形成にも寄与するため、タンパク質組成の違いによるばらつきを最小限に抑えます。
関連製品Pierce BCA Protein Assay KitPierce BCA Protein Assay Reagent BPierce BCA SolidFor Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.