TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencingは、Taqポリメラーゼ増幅PCR産物をシーケンシング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、5分間の高効率ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します。各キットは、特別にデザインされたシーケンシングプライマー部位を含むpCR™4-TOPO™ TAベクターを使用しており、各反応からより多くのインサート配列とより少ないベクター配列を戻すことができます。また、お客様のニーズや予算に応じて、さまざまなコンピテントセル付きまたはコンピテントセルなしでご利用いただけます。これらのキットには、目的のPCRフラグメントを含む組み換えベクターのクローニングおよび選択に必要なすべてのものが含まれています。TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencingの特長：

• より多くの配列を取得—標準的なシーケンシングプライマーを使用する場合、より多くのインサート配列とより少ないベクター配列が可能
• 迅速かつ簡単—PCRからクローンへの移行はわずか3ステップで完了し、ハンズオン時間はわずか5分
• 効率的—正確なインサートを使用して最大95%のクローンを取得
• 実証済み—10年以上にわたる4,000を超える引用による信頼性の高い性能

TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencing—概要

ベクター： pCR™4-TOPO™ TAベクター—シーケンシングの結果を改善するために最適化されたクローニングベクター

クローニング法：TOPO™ TA Cloning™—3´Aオーバーハング（Taq増幅）を含むPCR産物のベクターへのトポイソメラーゼIベース5分間ライゲーション

コンピテントセル：さまざまなオプション—一般用、高効率、バクテリオファージT1耐性、急速に増殖するなどのそれぞれの特徴を持つコンピテントセルのいずれかを含むキットから選択するか、または独自のものを使用

pCR™4-TOPO™ TAベクター—シーケンシング用に最適化
pCR™4-TOPO™ TAベクターからマルチクローニングサイトを除去し、シーケンシングプライマー部位とインサート部位の間の距離をわずか33 bpに短縮しました。つまり、シーケンシング反応ではベクター配列が少なく、インサート配列が多くなります。PCR™4-TOPO™ TA ベクターには、4 種類の一般的なシーケンシングプライマー用の部位があります。M13フォワード、M13リバース、T7、T3の4つが含まれています。キットにはそれぞれのアリコートが含まれています。

pCR™4-TOPO™ TAクローンの選択と操作
pCR™4-TOPO™ TAベクターには、アンピシリン耐性マーカーとナマイシン耐性マーカー、ポジティブセレクションと青／白スクリーニングのためのLacZα-ccdB遺伝子融合が含まれています。ベクターの最小化されたマルチクローニングサイトには、クローニングされたPCR産物の簡易的な切除のための隣接EcoRI部位と、シーケンシング前にネストされた欠失を生成するための独自のSse8387I部位がまだ含まれています。in vitro転写向けのT7およびT3プロモーターも用意されています。

簡略化されたTOPO™ベースのクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の手順、ベクターの調製、その他の時間のかかるDNA操作ステップは不要になります。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして、提供された大腸菌コンピテントセルで形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大95%まで使用できるため、スクリーニングするクローンの数を減らし、時間とコストを節約できます。このキットで使用されるpCR™4-TOPO™ TAベクターには3´Tオーバーハングが付属しており、3´Aオーバーハングを含むTaq増幅PCR産物を効率的にライゲーションできます。

クローニングの標準
クローニングの分野でTOPO™クローニング技術は10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼性の高いパートナーとなっています。高速で使いやすく効率的なTOPO™クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencingキットオプション
TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencingは、お客様のニーズに応じて異なる利点をもたらすさまざまなコンピテントセルとともに購入できます：

• 一般的なクローニング：TOP10（カタログ番号K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
• 高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™細胞（カタログ番号K4580-01、K4580-40）
• 一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号K4595-01、K4595-40）
• 迅速な増殖：Mach1™-T1Rの化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号K4530-20）
•自作のコンピテントセルを使用：柔軟性を高めながらコスト削減が可能（カタログ番号450030）

当社は、クリーンでシーケンス対応の組み換えプラスミドの分離に使用するためのPureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit（カタログ番号K4575-02）を含むキットのバージョンも提供しています。

関連リンク

• カスタムベクター構築およびクローニングサービス
• プラスミドDNA精製キット選択ガイド
• PCR試薬、装置、および消耗品