固定化TCEPジスルフィド還元ゲルを使用すると、還元剤からサンプルを分離するために、困難で非効率的なゲルろ過法を使用する必要がありません。固定化TCEPジスルフィド還元ゲルは、さまざまなスケールやフォーマット(バッチ、スピンカラム、重力フローカラムの手順など)に簡単に適合できます。この還元ゲルはシングルユースアプリケーション用で、再生や再利用はできません。
固定化TCEPジスルフィド還元ゲルの特長:
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無臭—作業台でタンパク質を還元し、より健全なラボ環境に貢献します
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安定性—冷蔵保存しても、活性の損失は実質的にありません
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汎用性—広範囲のpH、塩、界面活性剤、および温度条件でペプチドやタンパク質を還元します
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柔軟性—レジンスラリーは、スピンチューブ、カラム、バッチモードでの使用に柔軟性を提供します
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時間の節約—可溶性の還元剤を除去しないため、時間を節約し、サンプルを保存できます
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効率的—天然ジスルフィド結合とクロスリンキングによって取り込まれたジスルフィド結合の両方を切断します。
ジスルフィド還元剤に対する利点:•
還元剤を含まない優れた回収率—サンプルを損失することなく還元剤を除去し、還元分子を回収することは、DTTまたはβ-メルカプトエタノール(BME)に固有の問題です。固定化TCEPにより、透析や脱塩を行うことなく、還元タンパク質/ペプチドを高収率(85%以上)で回収できます。
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無臭—DTTやBMEとは異なり、固定化TCEPは無臭なため、卓上で簡単に還元できます。
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空気中で安定—TCEPに固有の安定性があるため、固定化TCEPジスルフィド還元ゲルの取り扱い、使用または保管時に酸化を防ぐ特別な予防策が不要になります。
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扱いやすい—固定化TCEP還元剤を使用すると、各アプリケーションに必要な量の担体を容易に分注できます。さまざまなpH値(pH 4~9)および温度(5~95℃)で還元を実施できます。
トリアルキルホスフィンは、タンパク質、ペプチド、および他のジスルフィド結合を含む分子中のジスルフィド結合を還元する優れた薬剤としての役割を果たし[1、2]、他の官能基に対して比較的反応性がありません[3]。トリアルキルホスフィンTCEPは水溶液中で安定しており、ジチオトリトール(DTT)やβ-メルカプトエタノール(BME)などの他の還元剤でよく発生する急速酸化を受けません[4]。TCEPは、一般的なスルフヒドリル反応性試薬(例:マレイミド架橋剤)に干渉しません[5]。しかし、多くのプロトコルでは、還元剤とは別に還元サンプルを回収する必要があります。固定化TCEPジスルフィド還元ゲルにより、還元剤を使用せずにサンプルを還元し、還元したサンプルを迅速に回収できます。
固定化TCEPジスルフィド還元ゲルの使用に関する考慮事項:• 還元は広範囲のpH(pH 4.0~9.0)および温度(5℃~95℃)で起こります。
• ほとんどのタンパク質は変性剤なしで効率的に還元されます。ただし、グアニジン·HClなどの変性剤を加えると、固定化TCEPに内部ジスルフィドを曝露させるのに役立つ場合があります。
•尿素はスルフヒドリル基と反応するシアン酸を形成するため、変性剤としては推奨されません。
•金属が固定化TCEPに接触しないようにしてください。金属が接触すると、活性が低下します。
•還元中に5~20 mMのEDTAをサンプルバッファーに添加することで、Zn 2+、Cu 2+、Mg 2+などの二価金属によるスルフヒドリル基の再酸化を防止できます。
•ジスルフィドは時間の経過とともに再形成されるため、還元サンプルは還元後すぐに使用する必要があります。
関連製品Pierce™ TCEP-HClFor Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.