Thermo Scientific NAb Protein Gスピンキットは、さまざまな種類のサンプルから抗体を迅速かつ小規模にアフィニティー精製する場合に便利です。固定化タンパク質レジンが充填された微量遠心機用スピンカラム1本で、25~500 µLの血清またはその他のサンプルから100~1,000 µgのIgGを迅速に精製できます。実際に精製されるIgGの量は、サンプルの種類や使用する個々のスピンカラムによって異なります。各キットには、少なくとも10個の抗体サンプルを精製するのに十分な収集チューブ、バッファー、効率的なプロトコルが含まれています。
Pierce Protein Gアガロースは、抗体精製用の品質の高いアフィニティーレジンです。組換えProtein Gが高品質の6%架橋アガロースビーズ(CL-6B)に共有結合的に固定化されています。この特定の種類のアフィニティレジンは、非常に汎用性が高いクロマトグラフィー機能を組み合わせ、哺乳動物の血清サンプルから全IgGを高収量かつ高純度で精製できます。このアガロースビーズには、多くのアフィニティー精製システムに適した物理的および化学的性質があります。
Pierce Protein Gアガロースの特長:
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Protein G – 固定化Protein Gは、マウス、ヒト、ウシ、ヤギ、ヒツジの血清からのポリクローナルIgGの精製に最適(ヒトIgG3およびマウスIgG1アイソタイプを含む)
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アガロースレジン – タンパク質アフィニティー精製法でもっともよく使用されている6%架橋アガロースビーズ(CL-6B)を担体とする
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不活性で安定している – 優れた製造法により、無電荷で耐浸出性のある共有結合によってProtein Gが固定化されるため、非特異的結合が少なく、収量を低下させずに複数回の使用が可能
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標準的な結合能 – Pierce Protein Gアガロースは、固定化Protein Gの標準的な負荷を有し、結合能はヒトIgGでレジン1 mLあたり11~15 mg
Protein Gは、グループG
連鎖球菌に由来する細菌細胞壁タンパク質であり、現在は大腸菌
で組換え体として産生されています。Protein Aと同様、Protein Gは、Fc領域を介して、ほとんどの哺乳動物の免疫グロブリンに結合します。天然 Protein G には、2 つの免疫グロブリン結合部位のほかに、アルブミンおよび細胞表面結合部位もあります。組換え型の Protein G では、免疫グロブリンを精製するときに非特異的結合を低減するために、これらのアルブミンおよび細胞表面結合部位が除去されています。組換え Protein G には約 21.6kDa の質量がありますが、SDS-PAGE による見掛けの大きさは 31 ~ 34kDa です。IgG結合能はpH 5で最適ですが、中性に近い条件(pH 7.0~7.2)でも効率的に結合します。
Protein Aに比べて、Protein Gはヒト、マウス、ラットの血清に由来する幅広いIgGサブクラスに結合します。特に、Protein A と同様に他のアイソタイプを結合するだけでなく、Protein G はヒト IgG3、マウス IgG1、およびラット IgG の 3 つのアイソタイプへの強い結合を示します。そのため、このような種や抗体アイソタイプの関わる用途には通常、Protein G を推奨します。その他の種に対するProtein Gの結合能は、ウシ、ヤギ、ヒツジのIgGに対しては高いものの、ブタ、モルモット、イヌ、ネコのIgGに対してはProtein Aより弱くなります。
Pierce Protein G Agaroseは、Thermo Scientific AminoLink Coupling Chemistryを使用して調製されており、従来のリガンド固定化法と比べていくつかの利点があります。AminoLink固定化では、アガロースビーズの糖モノマーとProtein Aの天然リジン残基の間で、シンプルなアミド結合によって結合が形成されます。典型的な臭化シアン (CNBr) による固定化とは異なり、AminoLink では、非特異的結合の原因となり得る新規官能基が導入されず、安定で不可逆な結合が形成されます。その結果、抗体精製を複数回繰り返しても機能性固定化Protein Gを保持している結合能の高いレジンになります。
Pierce Protein G Agaroseは、多くの哺乳類種に由来する血清やその他の体液からIgGをアフィニティ精製するのに有効です。Protein Gは、ヒト、ヤギ、ヒツジサンプルに由来するほとんどのIgGアイソタイプに加えて、マウス抗体(IgG1を含む)にも適しています。
6%架橋アガロースビーズ(CL-6B)の特性:• pH安定性の維持:2~14(短期);3~13(長期)
•平均粒子径:45~165ミクロン
• 排除限界分子量:10,000~4,000,000 Da
• 最大流量:約1 mL/分(直径1 cmのカラムにおいて)
• 最大直線速度:30 cm/時
• 最大圧力:25 psi(1.5 bar)未満、「レジンが耐えられるカラム全体の圧力低下の最大値」と定義される(注:液体クロマトグラフィー装置に表示されたゲージ圧力は、カラム全体の圧力低下ではなく、システム全体の圧力の測定値である場合があります。)
詳細な製品データ•
抗体精製のための抗体結合タンパク質の使用関連製品Pierce™ Protein G AgaroseNAb™ Protein G Spin Columns, 0.2 mLFor Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.