GeneArt™部位特異的変異導入システムは、3時間以内に
in vitroで標的コンストラクト上に変異を形成できる最先端のシンプルで便利な、高効率の方法です。このシステムは、広く使用されているGeneTailor™部位特異的変異導入システムに代わるもので、現在市販されている部位特異的変異導入製品の最先端に位置するように完全に再設計されています。この製品は、当社の突然変異導入技術を次のレベルに引き上げます。注:PCR酵素はシステムに含まれないため、別途購入する必要があります。このキットに推奨される酵素は、AccuPrime™ Pfx DNAポリメラーゼです。
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高性能 – 最大14 kbのプラスミドに最大12ヌクレオチドを置換、欠失、挿入できます
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効率的 – 目的の変異体を初めて得られます。3 kbプラスミドでは、正しい変異が90%以上です
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高速 – シンプルで最小限の操作のプロトコルにより、3時間以内に変異プラスミドDNAが得られます
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汎用性 – さまざまなサイズのプラスミドや、あらゆるサンプル源から単離したDNAを使用でき、専用のベクター、宿主株、制限酵素部位は不要です
目的の変異を簡単に作製GeneArt™部位特異的変異導入システムで作製した変異は、DNAメチル化酵素、高忠実性DNAポリメラーゼ、組み換え酵素、および大腸菌のネイティブ
McrBCエンドヌクレアーゼの固有特性に依存します。プライマーに、希望する変異(最大12ヌクレオチド)を組み込むだけで、PCR、組み換え、形質転換の後に、最大90%の効率で目的の変異のみを含むベクターが得られます。変異を加えるテンプレートベクターとして、あらゆるサンプル源から最大14 Kbサイズのものまで単離できます。完全なコンストラクトを作製する場合や、関連のないDNAの大型断片を結合する場合には、
GeneArt™シームレスクローニングおよびアセンブリキット(カタログ番号A13288)または
GeneArt™高次遺伝子アセンブリシステム(カタログ番号A13286)をご覧ください。
最適な変異導入プロトコルGeneArt™部位特異的変異導入システムは、効率性と簡便性を最適化しています。DNAのメチル化ステップと増幅ステップを1つの反応にまとめたため、
in vitro DpnI消化ステップは不要です。メチル化と増幅後、増幅したPCR産物の10分間の
in vitro組み換え反応によりコロニー形成量が3~10倍に増加するため、より高い突然変異導入効率が得られます。変異したDNAをDH5α™
大腸菌細胞に最終的に形質転換すると、メチル化された親DNAが消化され、無傷の非メチル化変異誘発生成反応産物のみが残されます。精製ステップや追加の消化は必要ありません。個々のコロニーを翌日に選択して変異を確認できます。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.