GeneArt™特定部位突然変異誘発PLUSシステムは、当社の突然変異誘発技術を次のレベルにまで高め、大規模なプラスミドで単一または複数部位の変異をより効率的かつ短時間で誘発できるようにしたものです。

• 強力 — 最大14 kbのDNAプラスミド中の1、2、または3つの異なる部位で、最大3つのヌクレオチドの置換、欠失、または挿入を行います
• 柔軟 — 縮重ヌクレオチドでマルチサイト変異誘発を実行することも、縮退ヌクレオチドで最大25ヌクレオチド長または12ヌクレオチド長のシングルサイト変異を実行することもできます
• 効率的 — 初回でも目的の変異体を得られます。10 Kbのプラスミドで正しい変異体は90%を超えます
• 高速 — シンプルで最小限の処理プロトコルで、通常3時間以内に変異プラスミドDNAを取得できます
• 汎用的 — さまざまなサイズのプラスミドを使用でき、あらゆるソースから、特殊なベクター、宿主株、制限部位を必要とせずにDNAを単離できます

最適化された変異誘発プロトコル
GeneArt™部位特異的変位誘発システムは、高い効率性とマルチサイトを実現するためさらに最適化された「PLUS」キットです。第一世代のGeneArt™部位特異的変位誘発システムと同様、DNAメチル化および増幅ステップが1つの反応に組み込まれており、in vitro DpnI消化ステップは不要です。メチル化および増幅後、増幅されたPCR産物の15分間のin vitro再結合反応によって、コロニーの形成が3～10倍に増加し、その結果、より高い変異誘発効率が得られます。変異したDNAをDH5α™大腸菌細胞に最終的に形質転換すると、メチル化された親DNAが消化され、無傷の非メチル化変異誘発生成反応産物のみが残されます。精製ステップや追加の消化は必要ありません。個々のコロニーは、後日選択して変異を検証できます。

目的の変位体を簡単に作成
GeneArt™特定部位変異誘発PLUSシステムでの変位体の作成は、DNAメチラーゼ、高忠実性DNAポリメラーゼ、組み換え酵素、および大腸菌のネイティブMcrBCエンドヌクレアーゼの固有特性に依存します。シームレスなアセンブリおよび変位誘発のためのGeneArt™設計ツールを用いて目的の変位をプライマーに組み込むだけです（下記の「in silico設計サポート」を参照）。ベクターおよび変位誘発プライマーを組み合わせ、PCR後に組み換えおよび形質転換を行い、目的の変異のみを有するベクターを90%の効率で得られます。

in silico設計サポート
GeneArt™部位特異的変異導入で重要なステップとは、プラスミドの突然変異体の生成を成功させるために、適切な相同性と間隔を持つプライマーを正しく設計することです。設計プロセスを簡素化および迅速化するために、当社は無料のオンラインツールであるシームレスまたは高次のアセンブリおよび変位誘発を行うためのGeneArt™設計ツールを提供しています。このツールは、in silicoでの実験の設計をサポートします。このツールを使用すると、プラスミド配列のレビュー、目的の変異誘発のためのDNAオリゴの設計、変異遺伝子の最新のアミノ酸配列の提供、新しいコンストラクトのグラフィック表示が可能になります。また、Vector NTI™ソフトウェアと互換性のあるGenBankフォーマットで注釈付きシーケンスをダウンロードできます。

研究用限定です。ヒトまたは動物の治療もしくは診断用には使用できません。