Thermo Scientific Pierce Sulfo-SBED Biotin Label Transfer Reagentは、精製タンパク質を標識して、そのタンパク質の相互作用に結合ビオチンタグを転移するための多機能試薬です。

Sulfo-SBEDは、Sulfo-N-hydroxysuccinimidyl-2-(6-[biotinamido]-2-(p-azido benzamido)-hexanoamido) ethyl-1,3'-dithioproprionateの略です。これはヘテロ二官能性の化学クロスリンク剤で、一方の末端で1級アミンに、もう一方の末端でほぼすべてのタンパク質官能基に共有結合できます。Sulfo-SBEDは一般的なクロスリンカーとは異なり、ビオチン基と切断可能なジスルフィドスペーサーアームも含んでいます。これらの特性の組み合わせにより、相互作用するタンパク質を連続的にクロスリンクし、ビオチンアフィニティータグをあるタンパク質（精製された「誘引」タンパク質）から別のタンパク質（未知の「被誘引」タンパク質）に転移できます。ラベルトランスファーは、タンパク質相互作用の発見に有用な強力なin vitro法です。ますます多くの論文で、Sulfo-SBED Biotin Label Transfer Reagentが、これまでは未知のタンパク質相互作用の結合パートナーの同定や、他のタンパク質相互作用の特異的なタンパク質結合ドメインのより詳細な特性評価が使用されています。

ラベルトランスファー実験の一般的なプロトコル：

• 数マイクロリットルの溶解したSulfo-SBED試薬をPBS中の精製済み誘引タンパク質0.5～1 mLに添加。
•混合物を暗所で氷上または室温で30～120分間インキュベーション。
•（薄明かりの下で）脱塩または透析して、標識済み誘引タンパク質から余分な未反応のSulfo-SBEDを除去。
•標識誘引タンパク質を、細胞ライセート、またはその他の推定標的相互作用タンパク質（「被誘引」）を含む溶液に添加。
•相互作用複合体が形成されたら、溶液に紫外線（365 nm）を数分間照射。
•以下のいずれかの方法で生成物を分析：
•ウェスタンブロッティング：DTT中のクロスリンクを切断し、SDS-PAGEでタンパク質を分離した後、ストレプトアビジン-HRPを用いたウェスタンブロッティングによりビオチン化バンドを検出。
•精製と質量分析、またはシーケンシング：トリプシン消化の後にビオチン化タンパク質またはペプチド断片をアフィニティー精製し、MSまたはシーケンシングにより、関連するタンパク質を特性評価。

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