Ambion Cells-to-cDNA™ IIキット（特許出願中）は、培養哺乳類細胞からのcDNAを2時間以内に生成します。RNAの単離は不要です。このキットは、100反応分に十分な試薬が含まれており、少数の細胞、多数の細胞サンプルに対して逆転写反応を行いたい場合、またはRNA単離に不慣れな科学者に最適です。

•RNAの浄化は不要です
• 2時間以内に培養中の細胞からcDNAへ
• わずか1セルで希少なメッセージを検出
• RNA単離のための設備がないラボに最適です

RT-PCRアプリケーションに最適
Cells-to-cDNA IIキット（特許出願中）は、RNase不活性化およびDNase I処理をRT-PCR対応の細胞溶解バッファーに統合し、RNA単離が完全に不要になります。ほとんどの細胞溶解バッファーには強力な変性剤が含まれており、これを酵素反応に加えると、ほとんどの酵素が阻害または不活性化されます。強力な変性剤が含まれていない溶解バッファーを使用すると、内在性RNaseは迅速に細胞RNAを分解できます。Cells-to-cDNA™ IIキットには、ダウンストリームの酵素反応を損なうことなく内在性RNaseを不活性化する新しい細胞溶解バッファーが含まれています。RNaseの不活性化後、細胞ライセートをcDNA合成反応に直接加えることができます。Cells-to-cDNA™ IIは、ワンステップおよびツーステップのRT-PCRプロトコルの両方に対応しています。
定量的—直線的な結果と検出可能なDNA汚染なし
入力細胞数におけるバリエーションに対してCells-to-cDNA™ IIの定量的で直線的な反応を示すために、ABI 7700 シーケンス検出システムを使用してリアルタイムな定量的RT-PCR実験を実施しました。プロッティングサイクルしきい値（Ct）とGAPDHの細胞濃度の比較により、0.99の相関性を持つ標準曲線が得られました。したがって、Cells-to-cDNA™ IIは、リアルタイムRT-PCRツーステップアッセイで1～10,000個の細胞／µLの直線的な結果をもたらします。また、GAPDH実験のためのマイナステンプレートPCRコントロールがネガティブで、ゲノムDNAが完全に除去されたことを示していることにも留意する必要があります。
シンプルな手順
このキットには、培養細胞からPCRに対応したcDNAに2時間以内に移動するために必要なすべてのものが含まれており、RNAの単離は不要です。細胞はまずPBSで洗浄し、次に細胞溶解バッファーで再懸濁します。短時間加熱すると細胞が同時に溶解し、RNaseが不活性化します。その後、必要に応じてDNase消化を行い、ゲノムDNAを分解し、その後に熱不活性化ステップを行います。その後、細胞ライセートの一部を、付属の試薬を用いた逆転写反応で使用しますAM2050AM2052)：
SuperTaq™熱安定性Taq DNAポリメラーゼが推奨されており、単品で販売されています（SKU# AM2050およびAM2052）。1 kbを超える断片の最適な増幅には、SuperTaq Plus熱安定性Taq DNAポリメラーゼ（SKU# AM2054およびAM2056）を使用します。