マイクロプレート用Click-iT EdU増殖アッセイは、哺乳類細胞増殖の測定において、従来のBrdUベースの方法よりもシンプルで堅牢な方法を提供します。EdU(修飾チミジンアナログ)を新たに合成したDNAに組み込むと、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)が特異性の高いクリック反応により共有結合します。その後、HRP基質であるAmplex UltraRed試薬を添加し、得られた蛍光シグナルを検出します。このアッセイは、HRPがEdUに非常に特異的に結合しているため、マイクロプレートフォーマットでの哺乳動物細胞増殖の高感度かつ信頼性の高い測定を実現します。
マイクロプレート用Click-iT EdU増殖アッセイの特長:
•性能の改善 — 組み込まれたEdUにHRPが直接結合することでアッセイ感度と精度が向上
• 信頼性の向上 — アッセイフォーマットの改善によりウェル間のばらつきが低下
• プロトコルの簡素化 — データ取得までの時間が短縮し、プロトコルへの準拠が容易
• マルチプレックス対応 — アッセイが他のセルヘルス試薬と簡単にマルチプレックス化できるため、サンプルあたりのデータ量が増加
細胞増殖の測定は、細胞の健康の評価、遺伝子毒性の測定、および抗がん剤の評価の基本的な方法です。増殖を測定する最も正確な方法は、DNA合成を直接検出することです。本来、これは、放射性ヌクレオシド(例:3H-チミジン)を組み込むことで実現されていました。この方法に代わって、ヌクレオシドアナログブロモデオキシウリジン(BrdU)の抗体ベースの検出が使用されるようになりました。BrdUを新たに合成されたDNAに組み込み、BrdU分子を抗BrdU抗体に曝露させるには変性が必要です。変性には過酷な方法(HCl、熱、または酵素)が使用され、時間がかかり、一定した実行することが困難です。
Click-iT EdU増殖アッセイはBrdUアッセイに代わる方法です。ヌクレオシドアナログEdU(5-エチニル-2´-デオキシウリジン)が生細胞に添加され、活性DNAの合成中にDNAに取り込まれます。組み込まれたEdUにはアルキン基が含まれており、高特異性の銅触媒共有結合反応(「クリック反応」)を使用してHRPに存在するアジド基に共有結合します。次に、Amplex UltraRed試薬を添加し、HRPによる高蛍光製品への変換が記録されます。その際には、蛍光マイクロプレートリーダー(励起:568、発光:585 nm)が使用されます。Amplex UltraRed試薬は、高い吸光係数、優れた量子効率、および自動酸化に対する耐性を備え、他の蛍光または比色HRP基質よりも高い感度と幅広いアッセイ範囲を提供します。また、蛍光または吸光度測定による検出により、汎用性も提供します。
Click-iT EdU増殖アッセイは、抗BrdUベースのマイクロプレート増殖アッセイと比較して少量の反応部分を使用し、抗体やDNAの変性を必要としません。どちらもアッセイ性能を低下させる可能性があります。さらに、ストレプトアビジン-ビオチン結合は不要であり、高レベルの内在性ビオチンを有する細胞に必要なビオチンブロッキングステップもありません。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.