CellEvent Senescence Green Flow Cytometry Assay Kitを使用することで、β-ガラクトシダーゼ加水分解による細胞老化のフローサイトメトリー検出が可能になります。キットには、最適化されたバッファーと、2つのガラクトシド部位を含むフルオレセインベースの試薬が含まれており、β-ガラクトシダーゼの特異的なターゲットとなります。β-ガラクトシダーゼの活性化は、老化細胞のバイオマーカーとして一般的に使用されます。このヒドロラーゼ酵素はリソソームに存在し、酸性pH条件下でβ-ガラクトースを単糖類に変換します。酵素によって分離された生成物は、細胞内タンパク質の共有結合により細胞内に保持され、490/514 nmで吸収／発光の最大値を示す蛍光性シグナルを発します。

CellEvent Senescence Green Flow Cytometry Assay Kitの特徴は以下のとおりです。
•βフローサイトメトリーによるガラクトシダーゼ加水分解の蛍光検出
• 固定細胞アッセイ
•マルチカラー対応

正常な細胞が、一般的にヘイフリック限界と呼ばれる限られた複製寿命の終わりに達すると、細胞死のプロセスを経ることなく、代謝的に活性を維持したまま老化期に入ります。これらの老化細胞は、多核細胞の出現、空胞化の増加、pH依存性β-ガラクトシダーゼの発現、細胞が肥大化および拡張する形態学的変化を含む特定の表現型の状態を導入します。さまざまなメカニズムにより、腫瘍抑制、腫瘍進行、老化、および組織修復に役割を果たすことがあります。

β-ガラクトシダーゼはリソソームに存在し、酸性のpH条件下でβ-ガラクトシドを単糖に変換します。この活性はリソソソームpH 4で最適ですが、従来のアッセイではpH 6で測定します。β正常化されたガラクトシダーゼ活性は、試験に使用されるpH値にかかわらず、老化細胞では、老化前細胞の2倍大きいことが示されています。

従来、β-ガラクトシダーゼの比色基質である5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-Ｄ-ガラクトピラノシド（x-gal）は、in vitroでの細胞内の代謝活性の検出に使用されてきました。β-ガラクトシダーゼによって加水分解されると、X-galは青色の沈殿物に変化するため、フローサイトメトリーアッセイには適していません。そのため、当社は、フローサイトメトリーアッセイで老化細胞の検出に使用できるβ-ガラクトシダーゼ用の高感度の蛍光基質を開発しました。